permeação cutânea in vitro como ferramenta auxiliar para o estudo ...

• Injeção em triplicata - 20µL
• Lavagens da agulha – três vezes com metanoL
4.2.1.2 Fase Móvel
Com base na metodologia proposta por Velikinac et al. (2004), utilizou-
se como fase móvel a solução de acetato de amônio 0,5% adicionada ao
metanol (20:80v/v). A mistura foi em seguida filtrada, utilizando o sistema
filtrante e filtros de papel com 0,45µm e deaerada por sonicação por 30
minutos em Ultra–som. Esta solução foi previamente preparada no momento
da realização das análises.
4.2.2 Construção da Curva Analítica do Cetoconazol por CLAE
A curva analítica foi construída com 8 pontos (VELIKINAC et al. 2004).
Segundo a metodologia descrita na Resolução RE n° 899 da ANVISA em
“Guia para validação de métodos analíticos” (BRASIL, 2003), são necessários
no mínimo 5 concentrações diferentes, e procedimentos alternativos devem
ser justificados.
Com três pesagens em dias diferentes, a solução estoque padrão de
cetoconazol foi preparada utilizando-se uma amostra de 10mg de
cetoconazol padrão secundário, solubilizado em metanol em um balão
volumétrico de 10mL, sendo em seguida o volume ajustado até a marca
com o mesmo solvente. Obteve-se desta maneira soluções de
concentração 1000µg/mL. Estas soluções foram diluídas em triplicata (n=9),
obtendo-se uma série de soluções finais com concentrações de 6, 10, 12,5,
25, 50, 125, 250 e 500µg/mL, Tabela 1, e uma solução padrão em metanol
com concentração 100µg/mL, sendo esta última, utilizada como solução
padrão nas determinações por CLAE.
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