Untitled - Biotecnologia

Figura 2. Curva experimental de crescimento da Acinetobacter johnsonii em
meio suplementado com pesticida, para concentrações de campo e 10X mais
concentrado: a) Diuron, b) Iprodione, c) Propanil, d) 3,4 Dicloroanilina, e)
Metalaxil, f) Curva experimental de crescimento da Acinetobacter johnsonii
em meio suplementado com 1% Dextrose: Teste
verificação de ocorrência de degradação
do Metalaxil pela bactéria Acinetobacter
johnsonii, pois foi verificado que
Pythium sp não cresce em altas concentrações
deste fungicida.
Foram preparados dois erlenmeyers
contendo meio de cultura de sais minerais
líquido (MS), sendo posteriormente
autoclavados e suplementados com 10
µg.i.a.ml -1 de Metalaxil cada. Em um erlenmeyer
foi colocada à bactéria Acinetobacter
johnsonii e em outro não, pois
este era o controle. Os erlenmeyers foram
levados para agitador orbital a 150 rpm,
em temperatura de 32°C por dez dias.
Após este período os erlenmeyers foram
retirados e acrescentaram-se 3,2g de ágar
em cada erlenmeyer, que foi autoclavado
novamente por 15 minutos na temperatura
de 121ºC. O Pythium aphanidermatum
foi então inoculado em placa de
petri contendo o meio de cultura MS
preparado anteriormente, e incubado
por dois dias em estufa com temperatura
controlada de 28°C. Foram realizados
visualização macroscópica e registro
fotográfico para análise do experimento.
3.RESULTADOSEDISCUSSÃO
Através da seleção das seis linhagens
bacterianas, Acinetobacter johnsonii foi
à única linhagem apta a crescer em todos
os pesticidas testados, em ambas as
concentrações. Por essa razão foi selecionada
para o teste de cinética de crescimento
(Figura 1). No entanto, outros
parâmetros tais como adição de fontes
de nitrogênio ou mesmo aminoácidos
não foram avaliados neste estudo, os
quais poderiam contribuir para aumentar
a capacidade metabólica de algumas destas
linhagens (SPESSOTO, 2002).
Na literatura não foram encontradas
pesquisas com Acinetobacter capazes de
metabolizar os pesticidas utilizados no
presente estudo. No entanto, HAO (2002),
verificou que espécies do gênero Acinetobacter
demonstram capacidade em utilizar
fenol e clorofenol transformando-os em
metabólitos menos tóxicos.
Outro estudo utilizando o microrganismo
Streptomyces demonstrou que esta
bactéria foi capaz de metabolizar doze
diferentes tipos de herbicidas, sugerindo
este microrganismo como alternativa na
remediação de solos contaminados com
herbicidas (SHELTON, 1996).
Dos cinco pesticidas avaliados (Figura
2b), os maiores valores de absorbância
foram observados para o fungicida Iprodione,
na maior dose testada.
Para o 3,4 Dicloroanilina (Figura 2d),
o tratamento com a menor dose de aplicação
(2,5µg.ml -1 ), houve aumento muito
acentuado do crescimento nas primeiras
24 horas de incubação da bactéria, seguida
de uma queda também acentuada ao
final das 48 horas de incubação. Após este
período o crescimento da Acinetobacter
johnsonii na presença do 3,4 Dicloroanilina
foi bem mais discreto, porém contínuo.
Provavelmente no caso da Acinetobacter
johnsonii, as enzimas envolvidas na
degradação inicial da molécula da anilina
sejam inespecíficas e, desta forma podem
agir prontamente na molécula. No entanto,
para ocorrer o ataque ao anel aromático
do metabólito, existe a necessidade de
um período maior de adaptação das vias
metabólicas da bactéria, com a expressão
de genes para a síntese de enzimas específicas
para esta etapa de degradação
(SPESSOTO, 2002).
As vias metabólicas da Acinetobacter
johnsonii estariam teoricamente aptas à
degradação das moléculas fungicidas (iprodione,
Metalaxil), enquanto que no caso
das moléculas herbicidas (Diuron, Propanil),
haveria a necessidade de uma maior
fase de aclimatação ou adaptação deste
microrganismo (SPESSOTO, 2002).
No teste de sensibilidade do microrganismo
Pythiumaphanidermatum em relação
ao Metalaxil, o microrganismo demonstrou
ser sensível a concentrações
superiores a 2 µg.ml -1 , o que faz deste um
possível bioindicador do composto. Na
literatura não foi encontrado nenhuma
pesquisa com este microrganismo como
indicador da presença de fungicidas.
Neste experimento foi notada a pre-
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