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Micropropagação de PESQUISA Paricá aricá (Schizolobium amazonicum Huber Ex Ducke) Fotos e Ilustrações cedidas pelos autores Indução de brotações a partir de segmentos nodais Iracema Maria Castro Coimbra Cordeiro Eng. Florestal Mestranda /FCAP cordeiro@canal13.com.br Osmar Alves Lameira Eng. Agro. Doutor/Pesquisador Embrapa Amazônia Oriental osmar@cpatu.embrapa.br Evaristo Francisco de Moura Terezo Eng.Florestal, consultor terezo@terra.com.br Paulo Luís Contente de Barros Eng. Florestal Prof. Dr. FCAP char@amazon.com.br Selma Toyoko Ohashi Eng.Florestal. Doutoranda / FCAP ohashi@terra.com.br INTRODUÇÃO As espécies arbóreas de interesse econômico constituem um dos grupos mais sujeitos à depredação devido ao seu extrativismo desordenado. Portanto, o estudo propagativo por sementes ou por métodos assexuados é extremamente importante no resgate e conservação da variabilidade genética destas espécies. Neste sentido, investigações a respeito de espécies florestais, de rápido crescimento, têm avançado constantemente, sobretudo no que se refere à multiplicação rápida de uma Figura 1 – Fluxograma da metodologia adotada para indução de brotações de paricá determinada cultivar e a uniformização de atributos tecnológicos da madeira. Desse modo, a utilização da cultura de tecidos apresenta-se como uma importante ferramenta quando se pretende multiplicar vegetal promissor, assim como diminui a pressão e o predatismo sobre as florestas. Nos últimos anos, a técnica de cultura de tecidos vegetais in vitro tem sido aplicada para propagar e multiplicar plantas lenhosas (Sommer e Wetzstein,1984) através do uso de calos, órgãos, células e culturas de protoplastos com resultados satisfatórios, não diferindo muito dos tipos utilizados para outras espécies de plantas. O potencial de obter maiores e melhores plantas mediante técnicas de clonagem, se origina da capacidade do explante (pequena parte do tecido) em capturar os componentes genéticos aditivos e não aditivos (Assis, 1996) ao ser colocado em condições físicas e químicas artificiais (Serra, 1999) induzindo o vegetal a promover seu melhor desenvolvimento e crescimento. Amicropropagaçãoatualmentetem sido muito utilizada, principalmente com a finalidade de clonar árvores selecionadas para o melhoramento genético (Pasqual e Barros, 1991), produção em larga escala visando o reflorestamento, revitalização de áreas depauperadas e produção bioenergética. Esta estratégia de desenvolvimento possui vantagens de prevenir a disseminação de pragas e doenças de uma geração para outra, obter um número elevado de plantas num curto espaço de tempo (Souza et al., 1995), do 78 Biotecnologia Ciência & Desenvolvimento - nº 29
mesmo modo que propicia a conservação dos recursos naturais, manutenção do patrimônio genéticoedabiodiversidade(Gomes, 1987). Grattapaglia e Machado (1990) destacam a técnica como a mais difundida, precisa e concreta. Oparicá(Schizolobiumamazonicum) é, preferencialmente, propagado por semente, é uma espécie rústica pouco exigente em adubação e de fácil adaptação em diversos tipos de solo, razão pela qual vem sendo bastante cultivada. Árvore de grande porte chegando a alcançar até 30 m de altura. Sua madeira é branca, mole e leve, sendo utilizada na fabricação de forros, palitos de fósforos, papel, compensados, pasta de celulose, laminados de alta qualidade (Melo etal, 1983). No entanto, tem sido observado que existe grande desuniformidade nos plantios. Sendo assim,aculturadetecidosaparececomo alternativa que possibilita a produção de dezenas ou centenas de mudas, uniformes, a partir de uma semente ou matriz selecionada (Melo et al, 1998) No contexto, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito de reguladores de crescimento na indução de brotações de Schizolobium amazonicum a partir de segmentos nodais de plântulas assépticas germinadas in vitro, com a finalidade de micropropagar a espécie. MATERIAL E MÉTODOS 1-LOCAL DE CONDUÇÃO DO ESTUDO As atividades foram realizadas no Laboratório de Recursos Genéticos e Biotecnologia da Embrapa Amazônia Oriental, Belém-Pará, conforme mostrado na figura 1. Foram utilizados explantes de plântulas assépticas cultivadas in vitro. As sementes de paricá utilizadas foram doadas pela empresa Tramontina Belém S.A. 2-SUPERAÇÃO DE DORMÊNCIA E ASSEPSIA DAS SEMENTES Figura 2 -Aspecto da plântula de paricá após 7 dias de inoculação. Embrapa Amazônia Oriental, Belém – PA. 2002 Com base nos resultados de experimentos anteriores, para superação de dormência e favorecimento do rápido metabolismo de germinação, as sementes de paricá foram imersas em água por um período de 24 horas e em seguida foi realizado o desponte, ou seja, as sementes sofreram um pequeno corte na região lateral do tegumento. No processo de assepsia, as sementes foram lavadas em água corrente por quinze minutos e imersas em álcool a 70% por um minuto e depois em solução de hipoclorito de sódio (NaOCl) a 3% por dez minutos, sendo cinco minutos de agitação. Em seguida, lavadas três vezes com água destiladaeautoclavada.Posteriormente, acondicionadas sobre um papel toalha, em placas de Petri, previamente esterelizada. O processo de desinfestação das sementes foi realizado em ambiente asséptico. 3- FONTE DE EXPLANTE Para germinação das sementes, utilizou-se meio de cultura composto de 0,1% de polyvinylpyrrolidone (PVP) e 0,6% agar, na ausência de sais e regulador de crescimento, determinado como eficiente em experimentos anteriores de germinação. O meio de cultura foi ajustado a um pH de 5,8 utilizando-se NaOH (hidróxido de sódio) e/ ou HCl (ácido clorídrico) em solução 0,5 N. O meio de cultura foi distribuído na quantidade de 40 ml por frasco. A autoclavagem foi realizada a 121°C durante 15 minutos. Posteriormente, as sementes foram inoculadas uma em cada frasco e levadas para sala de incubação, sob condições de cultivo de 16 horas de luz com uma irradiância de 25µmol.m -2 .s -1 , por um período de quinze dias. Após a germinação e desenvolvimento, as plântulasobtidasserviramcomo fonte de explantes primário, sendo os segmentos nodais utilizados como propágulos vegetativos para experimentos de micropropagação (Figura 2). 4- MULTIPLICAÇÃO IN VITRO DE SEGMENTOS NODAIS DE PARICÁ O meio de cultura básico utilizado neste experimento foi composto pelo meio MS (Murashige e Skoog, 1962) modificado acrescido com 0,1% de ácido ascórbico, 3g/L de sacarose e 0,6% de Agar. O meio de iniciação foi suplementado com três concentrações de BAP (6-benzilaminopurina) e duas concentrações de KIN (Cinetina). As seguintes concentrações foram testadas: BAP (4,43; 8,87 e 13,31 ìM) e KIN (9,29 e 11,61 ìM). O pH dos meios foi ajustado para 5,8 utilizando-se NaOH e/ou HCl em solução 1N. Em seguida foram distribuídos 10 ml de meio de cultura em tubos de ensaio de 20 x 150 mm. Posteriormente, os tubos foram tampados com papel alumínio e lacrados com filme plástico do tipo pvc. Em seguida foi realizada esterelização em autoclave a pressão de 1,2 atm e temperatura de 121°C, por 15 minutos. Para o controle da oxidação, e calogênese a concentração de nitrato de amônio (NH 4 NO 3 ) do meio básico foi reduzida à metade, indicada como melhor concentração em experimento anterior. Para equacionar o proble- Biotecnologia Ciência & Desenvolvimento - nº 29 79
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