Untitled - Biotecnologia

FIGURA 4 – VISTA PARTE
INFERIOR DO EQUIPAMENTO
DE CONTAGEM DE FLUORES-
CÊNCIA LUMINOSA AMARELO-
ESVERDEADO – CFLAE
FONTE: CANÇADO, 2001
cada, sendo em seguida moída a uma
granulometria em torno de 20 mesh.
EQUIPAMENTO DE CONTAGEM
DEFLUORESCÊNCIALUMINOSA
AMARELO-ESVERDEADO-CFLAE
O equipamento de Contagem de
Fluorescência Luminosa Amarelo-Esverdeado
– CFLAE possui um gabinete
(cuba) nas dimensões 50 x 40 x 65cm,
sendo de metal, a parte externa com
pintura na cor azul e a parte interna
com pintura fosca na cor preta, com
um visor de vidro de proteção a luz
ultravioleta, incolor e transparente, no
formato retangular nas dimensões 20 x
8cm, com uma abertura cilíndrica e
suporte de abrir/fechar, para entrada
de amostra. No interior da cuba é
fixada uma rampa de metal inclinada
na saída da abertura cilíndrica para que
possa deslizar as amostras e ser visualizada
pelo visor, esta inclinação deve
ser em um ângulo de 40 a 46 graus e
finaliza com uma abertura no inferior
da cuba para ser descartada a amostra
em balde de plástico. Esta rampa é
iluminada por uma fonte de luz ultravioleta
com o comprimento de onda
265nm. Conforme as Figuras 1, 2, 3 e
4.
MÉTODO DE ANÁLISE DE CRO-
MATOGRAFIA EM CAMADA DEL-
GADA – CCD (THIN-LAYER
CHROMATOGRAPHY – TLC)
A CCD é uma técnica útil porque é
relativamente rápida e requer quantidades
pequenas de material e principalmente
não requer equipamentos
sofisticados e caros, seu custo é pequeno
em relação a outros tipos de cromatografia.
As separações em CCD envolvem
duas fases nítidas: Estacionária e Móvel.
A fase estacionária é uma capa fina
de adsorvente (sílica-gel) cobrindo a
placa.
A fase móvel é um líquido em
desenvolvimento para cima o qual
viaja na fase estacionária, levando a
amostra (Figura 5).
As aflatoxinas da amostra separarão
de acordo com a adsorção da fase
estacionária, podendo ser mais fortemente
até mais fracamente.
A preparação da amostra para a
CCD foi utilizada 4,5 kg de grãos de
milho e efetuado o seu quarteamento
manual, que consiste em agrupar a
amostra e espalhá-la sobre uma superfície
lisa em forma de retângulo e por
meio de uma tira de madeira cortando
em metades até adquirir a quantidade
de duas amostras de 250g de amostra,
onde uma foi moída a granulometria
fina e homogênea (AOCS, 1997). As
amostrasforamacondicionadasemsaco
de plástico com fechamento em zíper
(Figura 6).
MÉTODO DE ANÁLISE COM
EQUIPAMENTO DE CONTAGEM
DE FLUORESCÊNCIA COM
LUMINOSIDADEAMARELO
ESVERDEADO – CFLAE
Uma amostra significativa de milho
integral é observada abaixo de ondas
longas de luz ultravioleta - 365nm. O
número de grãos que exibem fluorescência
luminosa amarelo-esverdeado
é contado e relacionado ao conteúdo
de aflatoxina.
Na Figura 7, pode-se verificar o
croqui básico do equipamento CFLAE.
O método de análise consiste em
pesar 4,5 kg da amostra e colocá-la no
funil de entrada do equipamento, ligase
a fonte de luz ultravioleta de comprimento
de onda de 265nm, abre-se
a parte inferior do funil e o controle de
passagem dos grãos é feita manualmente
de acordo com cada analista, a
leitura deve ser feita entre3a8minutos.
Pelo visor conta-se quantos grãos
nesta amostra existe com coloração
amarelo-esverdeado, este grão é separado
e feita a contagem no final. Somente
devem ser separados os grãos
de coloração amarelo-esverdeado, as
outras cores possíveis de aparecer são:
FIGURA 5 – EXEMPLO DE CROMATOGRAFIA DE CAMADA DELGADA
FONTE: CANÇADO, 2001
136 Biotecnologia Ciência & Desenvolvimento - nº 29