Untitled - Biotecnologia

filtro,posteriormente,hidratadoscom
a suspensão da planta H.canun a ser
testada em três diferentes concentrações:
D1-0.004g/ml; D2-0.006g/ml;
D3-0.009g/ml. O controle positivo
foi o Uretano-0,04g/ml e o controle
negativo a solução aquosa de sucrose
a 5%. Os machos foram cruzados
com fêmeas virgens, visando analisar
o efeito de compostos da H. canun
em células germinativas de diferentes
momentos da gametogênese,
seguindo o sistema de ninhada (ninhada
1: 72 horas; ninhada 2: 48
horas e ninhada 3: 48horas).
Cruzamentos
Cada ninhada corresponde a uma
fase do estágio da espermatogênese:
* ninhada 1 – corresponde a espermatozóides
(caracterizada por
células metabolicamente inativas);
* ninhada 2 – corresponde a espermátides
adultas;
* ninhada 3 – espermátides jovens.
A técnica de “brooding” caracteriza-se
pelo fracionamento da progênie
dos machos quando tratados em
ninhadas, através de cruzamentos
repetidos dos machos com fêmeas
virgens, em intervalos de 02 (dois) a
03 (três) dias, seguidos da determinação
da taxa de mutação em cada
ninhada separadamente. Cada ninhada
é representada por células germinais
que estavam em diferentes estágios
da espermatogênese ao longo
do tratamento (Regulu, 1983).
Segundo Ashburner (1989) a técnica
de ninhada permite analisar estágios
diferentes de células germinais
para efeitos genéticos induzidos.
A técnica de “brooding” pode ser
influenciada por alguns fatores tais
como:
- os genótipos parentais;
- a idade dos machos tratados;
- a temperatura durante o
“brooding”;
- o tempo de cruzamento de
cada ninhada;
- o número de fêmeas por
machos para cada ninhada.
A tabela 1, mostra o cronograma
de ovoposição do experimento, onde
foram cruzados machos tratados
“Ring-x” com fêmeas virgens ywsn 3
em 10 garrafas tipo “snap-cap” com
meio “standard” numa proporção de
30 machos para 60 fêmeas por garrafa.
No prazo de 10 dias após o cruzamento
(a 25ºC e 60% de umidade relativa)
após 3 dias de ovoposição as moscas
parentais foram retiradas, e a geração
F1 analisada, por 05 (cinco) dias consecutivos.
Os Broods1a3correspondem
a estágios pós-meióticos (SPTZ – maduros;
espermátide – adultas e jovens).
O primeiro cruzamento feito
com os machos tratados e que ocorre
por um período de 72 horas, “Brood 1”
(ninhada 1 – espermatozóide – células
sem atividade metabólica). Neste cruzamento,
a substância testada age apenas
sobre os espermatozóides, porém
não permite ter uma idéia da ação do
composto em toda espermatogênese,
por isso existe a necessidade de um
novo cruzamento. O novo cruzamento
chamado “Brood 2” (ninhada 2–espermátides
adultas – células com ativação
metabólica), permite informação
mais completa sobre a ação da
substância na gametogênese dos machos
tratados.
Cruzando esses machos com outras
fêmeas virgens tem-se o “Brood 3”
(ninhada 3 – espermátides jovens –
células com atividade metabólica). Os
Broods 1,2e3correspondem a estágios
pós-meióticos (Smith, 1983).
Análise da F1
A análise é feita, apenas da geração
F1, 10 dias após o cruzamento, com a
emergência das moscas adultas, durante
4-5 dias consecutivos. A combinação
de vários marcadores genéticos
(cor e forma do olho, cor do corpo,
forma das cerdas) permite o aparecimento
na F1, de onze classes fenotípicas:
* NORMAIS:
CLASSE 1: fêmea (Xp/Xm) – olho
vermelho, riniforme, corpo amarelo
e cerdas normais.
CLASSE 2: macho (Xm/Y+YBs)
– olho branco e em barra, corpo
selvagem e cerdas retorcidas.
* MUTANTES:
CLASSE 3: macho ( Xm/O) –
perda total do cromossomo X em
anel;olho branco e redondo ( normal),
corpo amarelo e cerdas retorcidas.
CLASSE4: mosaico ( Xm/O – Xm/
Xp) – perda total do cromossomo
X em anel na porção masculina;
olho branco e redondo, corpo
amarelo e cerdas retorcidas. No
lado feminino: olho vermelho e
Biotecnologia Ciência & Desenvolvimento - nº 29 131