Untersuchung des genetischen Schadens in peripheren ...

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Voraussetzung, dass die in Mikrokernen eingeschlossenen genetischen Informationen der Zelle nicht mehr zu Verfügung stehen und unwiderruflich verloren sind. Studien zeigen, dass Mikrokerne in der Lage sind, DNA zu synthetisieren (Kramer et al., 1990). Ob das im Mikrokern enthaltene genetische Material der Zelle jedoch gezielt für Transskription und Transformation zur Verfügung steht, ist nicht geklärt. Auch ist noch unklar, ob entstandene Mikrokerne im Anschluss an die Mitose enzymatisch abgebaut werden, so von Obe und Beek (1982) vermutet, oder unter bestimmten Voraussetzungen in den Hauptkern reintegriert werden können (Gustavino et al., 1994). Schließlich kann trotz vieler Indizien nicht ausgeschlossen werden, dass es sich bei Mikrokernen nur um ein „unschädliches“ Beiprodukt handelt, das mit der Karzinogenese nichts zu tun hat (Stopper, 1995). Fest steht, dass die verschiedenen Zellarten und Gewebe starke Unterschiede in Bezug auf die Mikrokernspontanrate zeigen und dass deren Kenntnis, besonders bei Vergleichen von Studienergebnissen an verschiedenen Zelllinien, von großer Bedeutung ist. Neben Umwelteinflüssen, Ernährungsgewohnheiten und Gesundheitsverhalten (z.B. Rauchen) wird die Mikrokernspontanrate insbesondere von Alter und Geschlecht beeinflusst (Fenech, 1998). 1.4 Vorstellung der verwendeten Testsysteme 1.4.1 Cytokinesis-Block-Micronuleus-Assay (CBMNA) Der Mikrokerntest spielt eine immer größere Rolle bei der Gentoxizitätsprüfung von natürlichen und synthetischen, potentiell karzinogenen Substanzen, unter anderem bei der immer größer werdenden Gruppe der Xenobiotika. Zu diesem Zweck wurde er für die Anwendung in Säugetierzellsystemen verschiedener Gewebe und Arten entsprechend modifiziert und angepasst. Für Stoffe, deren Kanzerogenität sich durch ihre direkte Wirkung auf das Genom erklärt und die auf diesem Wege Genmutationen auslösen können, sind Mutationstests (z.B. Ames-Test) Mittel der Wahl. Werden chromosomale Veränderungen durch andere 8
Mechanismen (z.B. durch indirekte DNA-Veränderung) verursacht, ist eine Detektion auf diesem Wege nicht möglich. Derartige Veränderungen (z.B. Chromosomenbrüche oder der Verlust ganzer Chromosomen) können aber sehr wohl durch den Mikrokerntest nachgewiesen werden, der außerdem weit weniger aufwendig ist. Gleichzeitig stellt er eine sensitive und verlässliche Methode zur Detektion und Quantifizierung chromosomaler Schäden dar. Mit seiner Hilfe können im Rahmen humaner Biomonitoring-Untersuchungen große Kollektive relativ zeit- und kostengünstig durchleuchtet werden. So wäre es z.B. möglich, akzeptable bzw. „normale“ DNA-Schadens-Werte in humanen Populationen zu bestimmen. Davon ausgehend können die Auswirkungen verschiedener „Lifestyle- Faktoren“ auf eben diese allgemeinen Grundschadenswerte ermittelt werden, um mögliche Präventivmaßnahmen zu ergreifen (Fenech, 1998). Das Grundprinzip des Mikrokern-Assays ist einfach. Die zu untersuchenden Zellen (z.B. humane periphere Lymphozyten) werden isoliert, kurze Zeit kultiviert und nach Cytospinpräparation (siehe 2.7.4-5) mit einem DNA-Fluoreszenzfarbstoff behandelt. Die Auswertung erfolgt mit dem Mikroskop, ausgestattet mit einem speziellen Filter für die den Farbstoff anregende Wellenlänge des Lichts. Wie schon oben erwähnt, ist die Komplettierung mindestens einer Zellteilung nach dem potentiell DNA-schädigenden Ereignis absolute Voraussetzung. Dementsprechend ist die Zellteilung Grundlage der Mikrokernentstehung und deshalb wird die Mikrokernrate maßgeblich von der Geschwindigkeit und insbesondere vom Anteil der sich teilenden Zellen bestimmt. Aus diesem Grund lag bei der ursprünglichen Version des Mikrokern- Assays, bei dem man versuchte, diesem Problem mit Zellsynchronisationstechniken zu begegnen, der Index des bestimmten chromosomalen Schadens unter dem absoluten Wert. Weiterhin wurde festgestellt, dass die Mikrokernfrequenz abnimmt, wenn mehr als eine Zellteilung vollzogen wird (Fenech, 1993). Aus diesem Grund wurde, und um vergleichbare Ergebnisse zu erzielen, beschlossen, dass nur Mikrokerne der Zellen gezählt werden, die sich ausschließlich einmal (nach DNA-schädigendem Ereignis) geteilt haben. Beim Auswerten der Präparate zeigte sich, dass der optimale Zeitpunkt zur Zählung der Mikrokerne das zweikernige Telophasenstadium ist. Durch ihr zweikerniges 9
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erhöhte Mikrokernrate wurde auch i
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Untersuchungsvariable entsprechend
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Diabetes und Nephropathie mit Losar
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ihrer Rolle bei der chronischen Nie
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5 Zusammenfassung Zahlreiche Studie
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6 Literatur RiedeU. N., Wiestler O.
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Krivošíková Z., Dušinská M., S
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Teschner M., Garte C., Rückle-Lanz
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Kontrollperson 2 Datum MK/1000 MK M
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Proband 2 Datum MK/1000 MK MW MK ST
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T-Test der Gruppe 2 (Test bei unabh
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7.2 Patientendaten - Verlaufsstudie
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7.3 Patientendaten - Lz-HDF- und HD
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Patient : 9 Geschl.: W Geb.: Dez 19
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7.3.2 HD-Gruppe Patient : 7 Geschl.
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Patient : 3 Geschl.: M Geb.: Jun 19
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Patient : 5 Geschl.: W Geb.: Mai 19
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7.4 Ergebnisse der statistischen Au
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