Untersuchung des genetischen Schadens in peripheren ...

Rydberg und Johanson (1978). Weiter entwickelt wurde diese Mikrogelelektrophoresetechnik,
um DNA-Schäden auf Einzelzellniveau festzustellen, 1984 von Östling und
Johanson, mit dem Unterschied, das Verfahren unter neutralen Bedingungen ablaufen
zu lassen. Allerdings erkannte man, dass unter neutralen Lysebedingungen nur die
Detektion von Doppel-Strang-Brüchen (DSB) möglich war, da die DNA-Basen-Paarung
nicht unterbunden wurde. So wurde die, nun offiziell als Comet-Assay bezeichnete,
Methode von Singh et al. (1988) modifiziert und lief nun wieder unter alkalischen
Lysebedingungen ab, wodurch auch die Detektion von Einzel-Strang-Brüchen (SSB)
und alkali-labiler Bereiche (ALS) möglich war. So verändert gewann der Comet-Assay
noch größere Sensitivität im Identifizieren genotoxischer Substanzen, weil nahezu alle
diese Stoffe mehr SSB bzw. ALS als DSB induzieren.
Das breit gefächerte Spektrum der zu detektierenden DNA-Schäden (Übersicht bei Tice
et al., 1995) umfasst neben den bereits erwähnten DNA-Strangbrüchen und ALS
praktisch alle bekannten DNA-Veränderungen, wie etwa oxidative DNA-Schäden,
Alkylierungen und die Bildung großer Addukte (DNA/DNA- und DNA/Protein-
Crosslinking), da sie alle eine direkte oder indirekte Induktion der DNA-Wanderung
bewirken. Gerade diese sozusagen universale Identifikation aller möglicher DNA-
Schäden ist Gegenstand ständiger Forschung und Untersuchungen mit dem Ziel, den
Comet-Assay dahingehend zu modifizieren, spezifische Klassen von DNA-Schäden
festzustellen (z.B. mit spezifischen Exzisionsenzymen). Sonderformen wie der
azelluläre Assay (Singh et al 1990) zur Detektion DNA-schädigender Substanzen
unabhängig ihrer Zytotoxizität oder der „molecular weight diffusion assay“ zur
Erfassung apoptotischer bzw. nekrotischer Zellen (Vasquez und Tice, 1997a)
entstanden.
DNA-Schäden immer häufiger mittels Comet-Assay zu erfassen, hat viele Vorteile.
Neben seiner hohen Sensitivität können, zum ersten Mal, Zellen aus proliferierenden
und nicht-proliferierenden Geweben verwendet werden. Zusätzlich ist die Verarbeitung
kultivierter Zellen (in vitro) möglich. Sein bedeutendster Vorteil ist allerdings die
rasche, einfache und kostengünstige Durchführbarkeit. Dieser Umstand ermöglicht es,
genotoxische (Umwelt-)Einflüsse auf den menschlichen Organismus, z.B. im Rahmen
von Biomonitoring-Untersuchungen (Kassie et al., 2000; Hartmann et al., 1998), zu
ermitteln und so spezifische Sicherheitsmaßnahmen bei identifizierten mutagenen
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