Untersuchungen zur Struktur und biologischen Aktivität von ...

DISKUSSION
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Ein Unterschied im Wachstumsverhalten zwischen den Koloniemorphotypen wurde
nicht festgestellt.
5.2 Isolierung der Polysaccharide
Zur Isolierung von Kapselmaterial wurden die unmittelbar zuvor geernteten Zellen
(siehe 3.2.1) in einer 1% wässrigen Phenol-Lösung langsam gerührt (siehe 3.2.2). Mit
der beschriebenen Methode [225] ist es möglich, Kapselmaterial von der Zelle zu extrahieren,
ohne die Zellwand zu zerstören. Elektronenmikroskopische Aufnahmen von
Mykobakterien vor und nach Behandlung mit Phenol belegen dies (siehe Abbildung 9).
Eine Alternative zur Phenol/Wasser-Extraktion, um Kapselmaterial zu gewinnen, stellt
nach Kultivierung in Flüssigmedium die Zentrifugation des Kulturüberstands dar (siehe
oben). Weiterhin bietet die Extraktion mittels Glaskugeln von geringem Durchmesser
unter Schütteln die Möglichkeit, Kapselmaterial durch Scherkräfte von der Zelle abzulösen
[223]. Ferner können die Bakterienzellen unter Verwendung der french press-
Methode [380] durch Hochdruck (bis zu 2000 bar) mechanisch zerstört werden, so dass
u. a. Kapselmaterial gewonnen werden kann. Der Nachteil ist einerseits darin zu sehen,
dass nach einer derartigen Behandlung alle Zellbestandteile als ein Gemisch vorliegen,
was die anschließende Fraktionierung erschwert. Andererseits ist bekannt, dass Mykobakterien
und Gram-positive Bakterien im Vergleich zu den meisten anderen prokaryotischen
Zellen aufgrund ihrer äußerst komplexen Zellwand (siehe 1.2.1)
mechanischen Kräften gegenüber weitaus widerstandsfähiger sind (siehe 1.1.1.3), so
dass ein vollständiger Zellaufschluss mit dieser Methode nicht gewährleistet ist. Das
haben Versuche gezeigt, bei denen der Aufschlussgrad unterschiedlicher Mikroorganismen
bei verschiedenen Drücken in der french press bestimmt wurde [381]. Zahlreiche
weitere Methoden zum mechanischen Aufschluss von Mikroorganismen wurden
etabliert [382;383;384;385;386], resultieren jedoch stets in der mehr oder weniger vollständigen
Zerstörung der Zellen. Es wurde daher in der vorliegenden Arbeit mittels
wässriger Phenol-Lösung eine milde chemische Extraktionsmethode zur Kapselisolierung
gewählt, die nachgewiesenermaßen (siehe 1.2.1.5) Material von der äußeren
Zelloberfläche ablöst, ohne die Zellwand zu zerstören, so dass keine störenden Zellwandbestandteile
die weitere Aufreinigung erschweren.
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