Untersuchungen zur Struktur und biologischen Aktivität von ...
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MATERIAL UND METHODEN<br />
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R3A (SHIMADZU) dokumentiert. Für das Temperaturprogramm wurden folgende<br />
Parameter gewählt: Nach 3 min wurde die Starttemperatur <strong>von</strong> 150°C um 3°C min -1<br />
erhöht, bis die Endtemperatur <strong>von</strong> 300°C erreicht wurde.<br />
Die Identifizierung der Zucker erfolgte über den Vergleich der Retentionszeiten zu<br />
einem zuvor injizierten Standardgemisch aus vier Pentosen, vier Hexosen <strong>und</strong> einer<br />
Heptose. Die Quantifizierung wurde durch Vergleich der Peakflächen zu dem internen<br />
Standard Allose durchgeführt.<br />
3.3.4.2 Gaschromatographie-Massenspektrometrie (GLC-MS) der Alditolacetate<br />
<strong>und</strong> acetylierten Methylglycoside<br />
Die massenspektrometrischen Analysen der Alditolacetate (siehe 3.3.4) <strong>und</strong> acetylierten<br />
Methylglycoside (siehe 3.3.5) im Anschluß an die Gaschromatographie wurden an<br />
einem HEWLETT-PACKARD-Massenspektrometer (HP 5989 A) durchgeführt. Die<br />
Trennung erfolge auf einer HP-5MS-Kapillarsäule mit Helium als Trägergas bei einem<br />
Säulenvordruck <strong>von</strong> 10 psi.<br />
Die EI (Elektronenstoßionisations-)-Spektren wurden bei 70 eV aufgenommen [332].<br />
Für die CI (chemische Ionisations-)-Spektren wurde als Reaktandgas Ammoniak<br />
verwendet. Die Temperatur der Ionenquelle betrug 200°C. Für das Temperaturprogramm<br />
der gaschromatographischen Trennung wurden folgende Parameter gewählt:<br />
Nach 3 min startete der Gradient <strong>von</strong> der Initialtemperatur <strong>von</strong> 150°C mit 5°C min -1 auf<br />
die Endtemperatur <strong>von</strong> 320°C.<br />
3.3.5 Methanolyse<br />
Zur Detektion <strong>von</strong> Neutralzuckern <strong>und</strong> Uronsäuren wurden in einem Schmelzröhrchen<br />
jeweils 100 µg der zu analysierenden Substanz (siehe 4.3; 4.4) in 500 µl 2 M<br />
methanolische Salzsäure gelöst. Das Röhrchen wurde zugeschmolzen <strong>und</strong> bei 85°C für<br />
16 h inkubiert. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch in ein 10 ml-Glasgefäß<br />
überführt <strong>und</strong> evaporiert. Die Peracetylierung wurde wie in 3.3.4 beschrieben<br />
durchgeführt. Die acetylierten Methylglycoside wurden durch GLC (siehe 3.3.4.1)<br />
getrennt <strong>und</strong> anschließend durch GLC-MS (siehe 3.3.4.2) identifiziert.<br />
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