Untersuchungen zur Struktur und biologischen Aktivität von ...

DISKUSSION
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Die Ausbeute dieses Kapselextraktes machte ungefähr 1% der eingesetzten Bakterienfeuchtmasse
aus (siehe 4.2). Den größten Anteil stellten die Zellen selbst dar, die jedoch
nach der Extraktion nicht näher untersucht wurden. Dies verdeutlicht die enorme Menge
an benötigtem Ausgangsmaterial (siehe 4.2).
Zur weiteren Isolierung und Fraktionierung des erhaltenen Gemisches wurde eine
Extraktionsmethode optimiert, mit der Kohlenhydrate einerseits von Proteinen und
andererseits in Fraktionen getrennt werden konnten (siehe Abbildung 15).
Mit Hilfe der phenolischen Extraktion (siehe 4.2) wurde Material gewonnen, das ein
Gemisch aus Proteinen und Kohlenhydraten darstellt. Dies wurde anhand von SDS-
Gelen nach elektrophoretischer Trennung und anschließender Färbung gezeigt werden.
Proteine wurden durch Färbung mit Coomassie sichtbar gemacht sowie Kohlenhydrat-
Strukturen durch Färbung mit Perjodsäure-Schiff-Reagenz (siehe Abbildung 17).
Die Phenol-Extrakte wurden einer Triton-Extraktion unterzogen, um hydrophile und
lipophile Substanzen voneinander zu trennen (siehe 4.2.1). Die Wasser-Phase enthielt
Proteine und Kohlenhydrate, was ebenfalls anhand von SDS-Gelen gezeigt werden
konnte (siehe Abbildung 17). Die Triton-Phase enthielt Proteine (siehe Abbildung 17)
und Lipoglycane, wie Lipoarabinomannan, Lipomannan und das biosynthetische Vorläufer-Molekül
Phosphatidylinositolmannosid [180]. Das konnte anhand von Western-
Blots mit anschließender Entwicklung durch das Lektin ConcanavalinA gezeigt werden
(siehe Abbildung 16b). ConcanavalinA wurde aus dem Grund verwendet, da es
spezifisch u. a. terminale α-Mannose-Reste erkennt [327], wie sie in allen
beschriebenen mykobakteriellen Lipoglycanen vorkommen [180]. Auch die Glycoproteine
können auf diese Weise sichtbar gemacht werden, da Mannose ein häufig
vorkommender Zucker prokaryotischer Proteinglycosylierungen ist [387]. So konnten
auch Glycoproteine aus M. tuberculosis durch ConA nachgewiesen werden
[388;389;390]. Ob es sich bei den Proteinen in der Triton-Phase um Lipoproteine
handelt, wurde nicht im Rahmen dieser Arbeit untersucht. Da der Western-Blot
(Abbildung 16b) dieser Fraktion neben LAM, LM und PIM auch zwei distinkte Banden
zeigt, die damit nachgewiesenermaßen glycosyliert sind, könnte es sich dabei um
Glycolipoproteine handeln, die bevorzugt in der Triton-Phase angereichert werden.
Diese wurden nicht weiter untersucht.
Zur Eliminierung der enthaltenen Proteine in der Wasser-Phase wurde eine Proteinpräzipitation
mit einer 46%igen Ammoniumsulfat-Lösung durchgeführt (siehe 4.2.2).
Die elektrophoretisch aufgetrennten Fraktionen der erhaltenen Sedimente und Über-
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