Erfolgreiche ePaper selbst erstellen
Machen Sie aus Ihren PDF Publikationen ein blätterbares Flipbook mit unserer einzigartigen Google optimierten e-Paper Software.
Pufferlösungen 4 bis 5 Stunden eingeengt. Die Zwischenlagerungg erfolgte bei -20°C<br />
bis zur Durchführung<br />
des ELISA.<br />
Abbildung 10: Testprinzip Enzyme-linked Immunosorbent Assay (eigene Abbildung).<br />
3.6.3 Enzyme-linked Immunosorbent Assay<br />
In den genutzten ELISA-Testkitss war ein spezifischer<br />
sekundärer Antikörperr in einer<br />
Immunplatte gebunden. Der primäre Antikörper bindet mit dem Fc-Fragment an den<br />
sekundären Antikörper, wobei die Fab-Fragmente sowohl die biotyniliertenn Peptide<br />
als auch die Zielpeptide binden. Die biotynilierten Peptide P interagieren mit einer<br />
Streptavidin-Merrettich-Peroxidase (Streptavidin-Horseradish-Peroxidas, SA-HRP),<br />
die einen Farbumschlag des jeweiligen Farbsubstrats<br />
katalysiert. . Die Intensität des<br />
Farbumschlags ist direkt proportional der Konzentrati<br />
on der Zielpeptide im Ansatz.<br />
Anhand einer Kalibrationskurve kann die Konzentration derr nachzuweisenden<br />
Peptide bestimmt werden. Beispielhaft soll der ELISA für die Bestimmung der CCK-<br />
Konzentration genauer ausgeführt werden (Abbildung<br />
10).<br />
3.6.4 Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) für Cholecystokinin<br />
Die Beschreibung der Testprozedur erfolgt schrittweise gemäßß Protokoll für den<br />
CCK-ELISA, Katalog<br />
EK-069-04 (Phoenix<br />
Europe, Karlsruhe, Deutschland)<br />
).<br />
33
Change language