TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

Anhang
Kapitel 12 Anhang
Materialvorbereitung des ELISA Kits
Das Chemokin MIP3-b/CCL19 wurde mit Hilfe eines Sandwich-ELISAs (Enzyme
linked immunoabsorbent assay) untersucht. Die Messungen wurden mit einem
speziell für das kanine MIP3b/CCL19 entwickeltem ELISA-Kit (E90096Ca 96 Tests,
USCN Life Science Inc., Wuhan, PR China) nach Herstellerangaben durchgeführt
(USCN Life Science Inc. 2011).
A: Vorbereitung Standard:
Der Standard muss 15 Minuten vor dem Assay nach folgenden Schritten vorbereitet
werden:
1. Materialien auf Raumtemperatur bringen bis höchstens auf 18-25°C.
2. Der lyophilisierte Standard wird mit 1ml Standardverdünnung vorbereitet, wobei
nur leicht geschüttelt werden darf, um ein Schäumen zu vermeiden. Anschließend
wird die Lösung 10 Minuten bei Raumtemperatur stehen gelassen.
3. Der Standard besitzt eine CCL19 Konzentration von 2000 pg/ml, welche für die
Standardverdünnungsreihe weiter verdünnt wird. Die höchste verwendete
Standardkonzentration im Assay beträgt 1000 pg/ml.
4. Sieben Röhrchen werden mit 0,5 ml Standardverdünnungsmittel und 500 µl
der Standardausgangskonzentration vorbereitet, die dann schrittweise weiter
verdünnt wird. Die Konzentrationen des CCL19 in den 7 Röhrchen entsprechen
1000 pg/ml, 500pg/ ml, 250pg/ ml, 125pg/ ml, 62.5 pg/ml, 31,2 pg/ ml und die
niedrigste Konzentration entspricht 15.6pg/ ml.
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