TiHo Bibliothek elib - Tierärztliche Hochschule Hannover

Material und Methoden
3.3. Methode
3.3.1. ELISA
Das Chemokin MIP-3β/CCL19 wurde mit Hilfe eines Sandwich-ELISAs (Enzyme
linked immunoabsorbent assay) gemessen.
In der Studie wurde ein speziell für das kanine MIP-3β/CCL19 entwickelter ELISA-Kit
verwendet (E90096Ca 96 Tests), welcher nach den Richtlinien des Herstellers
angewandt wurde (USCN Life Science Inc., Wuhan, PR China).
In dem ELISA-Kit ist eine Mikrotiterplatte enthalten, die mit einem monoklonalen
Antikörper spezifisch für das MIP-3β/CCL19 vorbeschichtet ist. Das Funktionsprinzip
des SANDWICH-ELISAs beruht darauf, dass das im Patientenserum oder -liquor
enthaltene MIP-3β/CCL19 an dem monoklonalen Antikörper der Mikrotiterplatte
haftet. An das gebundene Protein kann in einem weiteren Schritt nun ein zweiter
Antikörper binden. Nach Farbreaktion eines Substrates kann die Konzentration des
Chemokins gemessen werden. Zwischen den einzelnen Schritten werden die
überschüssigen Antikörper durch entsprechende Waschvorgänge entfernt.
Liquorproben wurden entweder unverdünnt eingesetzt oder wurden je nach MIP-3β /
CCL19 Ausgangskonzentration mit der Standardverdünnung bis zu einer Konzentration
von 1:13 verdünnt. Die Serumproben wurden für die Untersuchungen des
Proteins mit Hilfe des ELISAs unverdünnt eingesetzt.
Auf jeder 96- well Mikrotiterplatte wurden sieben Kavitäten für die Verdünnungsreihe
des Standards verwendet, eine Kavität wurde für den „Blank“ (Leerwert) und die
restlichen Kavitäten wurden für die Liquor- und Serumproben benutzt (siehe
Anhang).
Vier Liquor- und Serumproben von Hunden mit idiopathischer Epilepsie dienten als
Kontrolle. Eine dieser Proben wurde als Kontrolle auf jeder Mikrotiterplatte in jedem
Experiment mitgeführt. Als positive Kontrolle dienten Liquor- und Serumproben von
Hunden mit entzündlichen Erkrankungen und wurden ebenfalls bei jedem
Experiment in gleicher Konzentration mit untersucht.
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