desarrollo y validación de metodología para minimizar la ...

V.6 PROCESAMIENTO DE LAS MUESTRAS Y ESTÁNDARES
100 µl de suero o calibrador o control se desproteinizan por el agregado de
100 µl de acetonitrilo puro mas 10 µl de ZnSO4 al 10%. Se agita 30 segundos
en vortex y luego se centrifuga durante 4 minutos a máxima velocidad. 100 µl
de sobrenadante límpido se pasan a tubo nuevo y se diluye por el agregado de
300 µl de agua. Se agita en vortex y se inyectan 100 µl en el sistema
cromatográfico.
V.7 PARÁMETROS DE VALIDACIÓN
V.7.1 Selectividad y Especificidad
Este parámetro se determinó procesando 6 muestras de distintos orígenes
(plasmas libres de drogas), con el objetivo de evaluar, si en el tiempo de
retención de fenobarbital, carbamazepina y difenilhidantoína no se registre
señal cromatográfica. Asimismo no se observaron interferencias en el tiempo
de retención correspondiente a fenobarbital, carbamazepina y difenilhidantoína
en presencia de anticoagulante EDTA.
Se procesaron también 3 plasmas hemolizados y 3 plasmas lipémicos
(obtenidos con EDTA). En todos los casos, en el tiempo de retención de la
molécula en estudio no se observó señal que pudiera interferir en la
cuantificación de fenobarbital, carbamazepina y difenilhidantoína.
La inyección de agua tampoco mostró señal en el tiempo de retención de
fenobarbital, carbamazepina y difenilhidantoína.
V.7.2 Rango Analítico
El método fue desarrollado para los siguientes rangos:
FBT: 1,25 µg/ml a 100 µg/ml
CBZ: 0,25 µg/ml a 20 µg/ml
DFH: 0,3125 µg/ml a 25 µg/ml
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