desarrollo y validación de metodología para minimizar la ...
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Nivel 2: tomar 250 µl <strong>de</strong> nivel 4 y agregar 750 µl <strong>de</strong> agua o p<strong>la</strong>sma<br />
libre <strong>de</strong> droga.<br />
Nivel 1: tomar 125 µl <strong>de</strong> nivel 4 y agregar 875 µl <strong>de</strong> agua o p<strong>la</strong>sma<br />
libre <strong>de</strong> droga.<br />
Los calibradores así pre<strong>para</strong>dos correspon<strong>de</strong>n a una concentración en<br />
µg/ml <strong>de</strong>:<br />
Droga Nivel 4 Nivel 3 Nivel 2 Nivel 1<br />
Fenobarbital 100 50 25 12,5<br />
Se abarca un rango <strong>de</strong> concentraciones que contenga el rango<br />
terapéutico y se corren en el HPLC.<br />
Se construye una curva <strong>de</strong> calibración <strong>de</strong> señal en función <strong>de</strong><br />
concentración. En esta curva se interpo<strong>la</strong>n <strong>la</strong> señal <strong>de</strong> <strong>la</strong>s muestras y<br />
los controles y se obtiene el dato en concentración.<br />
3.6 FRECUENCIA DE CALIBRACIÓN:<br />
La calibración es diaria <strong>para</strong> cada corrida.<br />
3.7 CONTROL DE CALIDAD:<br />
Se utilizan los controles <strong>de</strong> calidad <strong>de</strong> BIO-RAD, Lyphochek therapeutic<br />
drug monitoring (TDM) levels 1 /2 /3 alicuotados y guardados siguiendo<br />
<strong>la</strong>s especificaciones <strong>de</strong>l fabricante.<br />
Los mismos se procesan y corren a diario en cada corrida. Se acepta un<br />
<strong>de</strong>svío máximo <strong>de</strong> +/- 2SD <strong>para</strong> los tres niveles <strong>de</strong> control. Por otro<br />
<strong>la</strong>do, se realiza un seguimiento <strong>de</strong> CCI según se <strong>de</strong>scribe en el<br />
procedimiento correspondiente.<br />
El tiempo <strong>de</strong> retención <strong>de</strong>l analito se <strong>de</strong>termina en cada corrida<br />
analítica, utilizando <strong>para</strong> ello el tiempo <strong>de</strong> retención <strong>de</strong>l calibrador. Este<br />
valor es registrado y es evaluado y aceptado por personal idóneo. La<br />
i<strong>de</strong>ntificación tanto <strong>de</strong> controles como <strong>de</strong> muestras se acepta si <strong>la</strong> señal<br />
se encuentra en los +/-20 segundos <strong>de</strong>l tiempo <strong>de</strong> retención fijado <strong>para</strong><br />
esa corrida.<br />
Si existiesen dudas respecto <strong>de</strong> <strong>la</strong> i<strong>de</strong>ntidad <strong>de</strong>l pico, se proce<strong>de</strong> a <strong>la</strong><br />
confirmación <strong>de</strong>l tiempo <strong>de</strong> retención <strong>de</strong>l analito, mediante el agregado<br />
a <strong>la</strong> muestra <strong>de</strong> estándar externo <strong>de</strong> fenobarbital en alta concentración<br />
evitando así el efecto <strong>de</strong> dilución.<br />
3.8 CONTROL DE CALIDAD EXTERNO:<br />
La <strong>de</strong>terminación esta sometida a los controles quincenales <strong>de</strong>l RIQAS<br />
(Therapeutic drugs programme).<br />
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