Genes IX Benjamin Lewin - PortuguesBR

15.3 AS ORIGENS PODEM SER MAPEADAS POR AUTO-RADIOGRAFI A E ELETROFORESE 379
olho representa urna origem ftxa e urna forquilha
de replicação em deslocamento. Quando gerado
pela replicação bídírecional, o olho represenra um
par de forquilhas de replicação. Em qualquer um
dos casos, o progresso da replicação expande o olho
aré que este finalmenre englobe todo o replicon.
Quando um replicon é circular, a presença de
um olho forma a estrutura 8, ilustrada na FIGURA
15.3. Os sucessivos estágios da replicação do DNA
circular do vírus polioma são visualizados por microscopia
eletrônica, na FIGURA 1!>.1 .
Estrutura e em replicação
Aparência
da estrutura e
por microscopia
eletrônica
FIGURA 15.3 Um olho de replicação forma uma estrutu ra e no
DNA circular.
lfU As Origens Podem Ser
Mapeadas por Autoradiografia
e Eletroforese
Conceitos Essenciais
• A movimentação da forquilha de replicação pode ser
detectada por meio de auto-radiografia, empregando
pulsos radioativos.
• A forquilha de replicação cria estruturas em forma Y que
alteram a migração eletroforética de fragmentos de DNA.
É possível determinar-se se um olho de replicação
possuí uma ou duas forquilhas de replicação de duas
maneiras. A escolha do método depende se o DNA
é wna molécula definida ou uma região não-identificada
de um genoma celular.
No caso de uma molécula linear defin ida, podemos
empregar a microscopia eletrônica (m.e.) para
medir a distância entre cada extremidade do olho em
relação à extremidade do DNA e, então, comparar as
posições das extremidades dos olhos em moléculas que
possuem olhos de tamanhos diferentes. Se a replicação
for unidirecional, apenas urna das exnemidades
irá mover-se; a oucra mantém-se frxa na origem. Se a
replicação for bidírecional, ambas irão mover-se; a
origem corresponde ao pomo central enne estas.
No caso de regiões indefi nidas de grandes genomas,
dois pulsos sucessivos de radioatividade
podem ser utilizados para marcar o deslocamento
das forquilhas de replicação. Se um pulso apresentar
uma marcação mais intensa que o ouuo, estas
podem ser diferenciadas pelas intensidades relativas
de marcação. Estas podem ser visualizadas por
autO-radiografia. A FIGURA !5.S mostra que na replicação
unidirecional um tipo de marcação é se-
. . . . .. . .. ...
~
REPLICAÇÃO UNIDIRECIONAL
REPLICAÇÃO BIDIRECIONAL
'lG R 1S.4 O olho de replicação aumenta à medida que as forquilhas
de replicação se deslocam ao longo do replicon. Observe
que o "olho" se torna maior que o segmento não-replicado. Os
dois lados do olho podem ser definidos, pois ambos exibem o
mesmo comprimento. Fotografia gentilmente cedida por Bernard
Hirt, Swiss Institute for Experimental Cancer Research (ISREC).
- Marcação de alta densidade
(incorporada primeiro)
- Marcação de baixa densidade
(incorporada posteriormente)
-- Não-marcado (invisível na auto-radiografia)
FIGURA 15.5 Diferentes densidades de marcação radioativa
podem ser utilizadas para diferenciar a replicação unidirecional
da bidirecional.