Genes IX Benjamin Lewin - PortuguesBR

672 CAPÍTULO 26 SPUCING E PROCESSAI•IENTO DE RNA
ria a correspondência de seqüências ou e.~truturas
específicas.
• É possível que rodos os sírios 5' sejam funcionalmeme
equivalemes e que codos os sítios 3'
sejam indistinguíveis, porém o splicíng deve
seguir regras que garantam que um sítio 5' seja
sempre conectado ao sítio 3' seguinte, no RNA.
Nenhum dos sítios de splicing ou as regiões adjacemes
possuem qualquer complementaridade de seqüência,
o que exclui modelos propondo o parearnemo
de bases complementares enrre as extremidades do
íntron. Experimemos utilizando precursores de RNA
híbridos revelam que, em princípio, qualquer sítio de
spficing 5' pode conectar-se a qualquer sítio de splicing
3 '. Por exemplo, quando o primeiro éxon da unidade
transcricional precoce de SV 40 é ligado ao terceiro
éxon da globina ~ de camundongo, o íntron
híbrido pode ser excisado, gerando uma perfeita conexão
entre o éxon SV 40 e o éxon de globina ~· De
fato, a imerpermutabilidade é a base da técnica de
captura de éxon descrita previamente na Figma 4.11.
Tais experimentos fornecem dois aspectos gerais:
• Os sítios de splicing são genéricos: estes não apresentam
especificidade em relaç.'io a precursores
de RNAS individuais e os precursores não
carreiam informações específicas (tal como estrutura
secundária) necessárias ao splicing.
• O aparato de splicing não é tecido-específico:
em geral, um RNA pode ser adequadamente
processado por qualquer célula, independente
deste ser normalmente sintetizado naquela
célula. (Discutiremos as exceções nas
quais existem padrões de splicíng alternativo
tecido-específicos na Seção 26.12, O Splicing
Alternativo Envolve o Uso Diferencial
das Junções de Splicing.)
Temos aqui um paradoxo. É provável que todos
os sítios de splicing 5' sejam similares ao aparato de
splicing, assim como todos os sítios de splicing 3' também
pareçam similares. Em princípio, qualquer sítio de
splicing 5 'pode ser capaz de reagir com qualquer sítio
de splicing 3 '. Contudo, em circw1stâncias normais,
o spficíng somem e ocorre entre os sírios 5' e 3' do mesmo
íntron. Que regras garantem que o reconhecimento
dos sítios de splicing seja mtríto, de forma que somente
os sítios 5 ' e 3 ' do mesmo íntron sejam removidos?
Os íntrons são removidos em uma ordem específica
de um RNA em particular? Pela realização de
um RNA bfotting, podemos identificar RNAs nucleares
que representam intermediários a partir dos
quais algu~s íntrons foram removidos. A FIGURA
26.5 apresema um blot dos precursores do mRNA
ovomucóide. Há urna série de bandas distintas, sugerindo
que o splicing ocorre por vias definidas. (Se
.... . .,. • t .. • _.. . '
mANA= 1,1 kb
Transcrito primário (5,5 kb)
Sem os íntrons 5 e 6
Sem os íntrons 4, 5, 6 e 7
Contendo apenas o íntron 3
mANA (1, 1 kb)
FIGURA 26.5 O northern b/oWng de RNA nuclear com uma
sonda ovomucóide identifica diferentes precursores do mRNA.
A composição das bandas mais proeminentes é indicada. Fotografia
gentilmente cedida por Bert W. O'Malley, Faculdade de
Medici na de Baylor.
os sete ímrons fossem removidos de forma totalmeme
aleatória, poderiam haver mais de 300 precursores
com diferemes combinações de íntrons,
sendo impossível visualizarrnos bandas distintas.)
Parece não existir wna via única, urna vez que podem
ser encontrados intermediários contendo diferentes
combinações de íntrons removidos. Contudo, parece
haver uma ou mais vias preferenciais. Quando apenas
um único íntron é perdido, quase sempre este corresponde
ao 5 ou 6. Q ualquer um pode ser o primeiro a
ser perdido. Quando dois ínrrons são perdidos, novamente
o 5 e o 6 são os mais freqüentes, embora existam
outras combinações. O ínrron 3 nunca (ou mtúto raramente)
é perdido em uma das três primeiras etapas do
splicing. A partir deste padrão, observamos que há uma
via preferencial na qual os íntrons são removidos na
ordem 5/6, 7/4, 211. 3. ~o entanto,