Genes IX Benjamin Lewin - PortuguesBR

Incubação com o
extrato de spli=ting
in vitro
----+-
26.15 A ENDONUCLEASE DE SPUUNG RECONHECE O tRNA 691
. . . . . . . . .
3'
5'
+
Par de bases
Eletroforese em gel
Precursor
I ANA
Íntron
FIGURA ? O sp/icing in vitro de tRNA de levedura pode ser
acompanhado pela anâlise do RNA precursor e de seus produtos,
por eletroforese em gel.
O = Par de bases Anticódon-íntron (AI)
FIGURA 2 ' As clivagens 3' e 5' do pré-tRNA em S. cerevisiae são
catalisadas por diferentes subunidades da endonuclease. Outra
subunidade pode determinar a localização dos sítios de clivagem,
medindo a distância a partir da estrutura madura. O par AI é
também importante.
5'
tM .. i A Endonuclease de Splicing
Reconhece o tRNA
Conceitos Essenciais
• Uma endonuclease diva os precursores de tRNA nas
duas extremidades do íntron.
• A endonuclease de leveduras é um heterotetrâmero que
contém duas subunidades catallticas (relacionadas).
• Esta enzima utiliza um mecanismo de medição para determinar
os sítios de clivagem de acordo com suas posições
relativas a um ponto na estrutura do tRNA.
• A nuclease de archaeas possui uma estrutura mais simples
e reconhece um motivo estrutural protuberânciahélice-protuberância
no substrato.
A endonuclcase é responsável pela especificidade
no reconhecimento do ímron. Esta diva o precursor
em ambas as extremidades do íntron. A endonuclease
da levedura é uma proteína heterotetramérica.
Suas atividades são ilustradas na F C RA
~o 2 . As subunidades relacionadas, Sen34 e Sen2,
divam os sítios de splicing 3 ' e 5 ', respectivamente.
A subunidade Sen54 pode determinar os sítios
de clivagem "medindo" a distância a partir de um
ponto na estrutura do tRNA. Esse ponto está situado
no cotovelo da estrutura em L (madura). O
papel da sub unidade Sen 15 não é conhecido, mas
seu gene é essencial à levedura. O pareamenro de
bases formado entre a primeira base na alça do anticódon
e a base que precede o sítio de splicing 3' é
necessário à di vagem do sítio de splicing 3'.
Uma interessante interpretação sobre a evolução
do spficing de tRNA é fornecida pelas endonu-
FIGURA '6 9 A endonuclease de sp/icing de tRNA de orchaeo
diva cada fita em uma protuberancia de um motivo protuberância-h
é li c e-pro tu berâ ncia.
cleases de archaeas. Estas são homodímeros ou homotetrâmeros,
nos quais cada subunidade possui
um sírio ativo (embora apenas dois dos sítios sejam
funcionais no tetrâmero) que diva um dos sítios de
splicing. A subunidade apresenta seqüências relacionadas
às seqüências dos sítios ativos das subunidades
Sen34 e Sen2 da enzima de levedura. Entretanto,
as enzimas de archat!a reconhecem seus substratos
de forma diferente. Ao invés de medirem a
distância a partir de determinadas seqüências, estas
reconhecem uma propriedade estrutural denominada
protuberância-hélice-protuberância. A FIGU­
RA 26.29 mostra que a clivagem ocorre nas duas
protuberâncias.