Genes IX Benjamin Lewin - PortuguesBR

668 CAPÍTULO 26 SPLICING E PROCESSAMENTO DE RNA
fmm O Splicing Está Associado à Exportação do
mRNA
• As proteínas REF ligam-se às junções de sp/idng,
associando-se ao spliceossomo.
• Após o splidng, estas permanecem ligadas ao
RNA, na junção éxon-éxon .
• As proteínas REF interagem com a proteína transportadora
TAP /Mex, que exporta o RNA através
do poro nuclear.
n:ll Íntrons do Grupo II Sofrem Auto-splicing
pela Formação de um Laço
• Os íntrons do grupo li se auto-excisam do RNA
por meio de um evento de splidng autocatalítico.
• As junções de splidng e o mecanismo de splicing
nos íntrons do grupo II são similares ao
splicing de íntrons nucleares.
• Um lntron do grupo II se enovela, assumindo
uma estrutura secundária que gera um sítio catalítico
semelhante à estrutura do íntron nuclear
U6-U2.
fmll O Splicing Alternativo Envolve o Uso
Diferencial das Junções de Splicing
• Éxons específicos podem ser excluídos ou incluídos
no produto de RNA pelo uso ou não de
um par de junções de splicing.
• Os éxons podem ser estendidos pela modificação
de uma das junções de splicing e pelo uso
de uma junção alternativa.
• A determinação do sexo em Drosophilo envolve
uma série de eventos de splicing alternativo em
genes que codificam produtos sucessivos de uma
via.
• Elementos P de Drosophila exibem splidng alternativo
específico da linhagem germinativa.
011 Reações de Trans-splicing Utilizam
Pequenos RNAs
• As reações de splidng geralmente ocorrem apenas
em eis, entre as junções de splicing de uma
mesma molécula de RNA.
• O trans-splicing ocorre em tripanossomas e vermes,
onde uma pequena seqüência (SL RNA) sofre
splidng nas extremidades 5' de muitos mRNAs
precursores.
• O SL RNA possui uma estrutura semelhante ao
sítio de ligação de Sm dos snRNAs U e pode
desempenhar um papel análogo na reação.
Fl!W! O Splicing do tRNA de Leveduras Envolve
Clivagem e União
• O splicing do tRNA ocorre por meio de sucessivas
reações de clivagem e de ligação.
RI A Endonuclease de Splicing Reconhece o
tRNA
• Uma endonudease diva os precursores de tRNA
nas duas extremidades do íntron.
• A endonudease de leveduras é um heterotetrãmero
que contém duas subunidades catalíticas
(relacionadas).
• Esta enzima utiliza um mecanismo de medição
para determinar os sítios de divagem de aco rdo
com suas posições relativas a uni ponto na estrutura
do tRNA.
• A nudease de orchaeas possui uma estrutura mais
simples e reconhece um motivo estrutural protuberância-hélice-protuberância
no substrato.
nD A Clivagem e a Ligação do tRNA São
Reações Distintas
• A liberação do íntron gera dois meios tRNAs que
se pareiam e formam a estrutura madura.
• As metades possuem extremidades incomuns de
5' hidroxil e 2'-3' fosfato clclico.
• A extremidade 5' -OH é fosforilada por uma polinucleotídeo
quinase, o grupo fosfato clclico
é aberto por uma fosfodiesterase, originando
uma terminação 2'-fosfato e um grupo 3'-0H;
as extremidades dos éxons são unidas por uma
RNA ligase, e o 2'-fosfato é removido por uma
fosfatase.
gJ) A Resposta à Proteína Não-enovelada Está
Relacionada ao Splicing de tRNA
• Ire1p é uma proteína da membrana nuclear interna,
cujo domínio N-terminal encontra-se no
lúmen do RE, e o domínio C-terminal, no núcleo.
• A ligação de uma proteína não-enovelada ao
domínio N-terminal ativa a nudease C-terminal
por autofosforilação.
• A nuclease ativada diva o mRNA Hacl, que libera
um íntron e gera éxons que são ligados por
uma tRNA ligase.
• O mRNA Hacl que sofreu splicing codifica um
fator de transcrição que ativa genes de chaperonas
que auxiliam,no dobramento de proteínas
não-enoveladas.
~ As Extremidades 3' dos Transcritos de poli
e pol!II São Gerados por Terminação
• A RNA polimerase I finaliza a transcrição em
uma seqüência terminadora de 18 bases.
• A RNA polimerase III finaliza a transcrição em
uma seqüência poli(U) 4
embebida em uma seqüência
rica em G-C.
mtDl As Extremidades 3' dos mRNAs São Geradas
por Clivagem e Poliadenilação
• A seqüência AAUAAA é um sinal de clivagem para
gerar uma extremidade 3' de um mRNA que é
poliadenilado.
• A reação requer um complexo protéico contendo
um fator de especificidade, uma endonuclease
e uma poli(A) polimerase.
• O fator de especificidade e a endonuclease clivam
o RNA a jusante ao AAUAAA.
• O fator de especificidade e a poli(A) polimerase
adicionam progressivamente cerca de 200 resíduos
A à extremidade 3'.
• Seqüências ricas em A-U na cauda 3' controlam
a poliadenilação ou desadenilaçãç durante o
desenvolvimento embrionário de Xenopus.
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