Genes IX Benjamin Lewin - PortuguesBR

632 CAPÍTULO 24 PROMOTORES E INTENSIFICADORES
Se as proteínas ligadas a um intensificador, situado
a vários kb de distância em relação a um promotor,
interagem diretamente com as proteínas ligadas
próximo ao sítio de iniciação, a organização
do D NA deve ser flexível o suficiente para permitir
que o imensificador e o promomr se localizem próximos.
Isro requer que o DNA imerveniente seja
projerado na forma de uma grande "alça''. Tais alças
foram observadas diretan1eme no caso do intensificador
bacteriano.
Há uma interessante exceção para a regra de que
os intensificadores atuam em eis em situações naturais.
Isto é observado no fenômeno de transvecção.
O pareamento de cromossomos somáticos permite
que um intensificador de um cromossomo
ative um promotor no cromossomo parceiro. Isto
reforça a idéia de que os intensificadores atuam com
base na proximidade.
O que limita a atividade de um intensificador?
Tipicamente, este atua sobre o promomr mais próximo.
Há situações onde um intensificado r está localizado
entre dois promotores, mas ativa somente
um desces, com base em concaros proteína-proteína
específicos entre os complexos ligados aos dois
elementos. A ação de um incensificador pode ser
limitada por um isolador - um elemento no DNA
que impede a ação do incensificador em promotores
simados além do isolador (ver Seção 29 .14, Isoladores
Bloqueiam as Ações de lntensificadores e
da Hecerocromatina).
A generalidade da inrensificação ainda não está
clara. Não sabemos que proporção de promotores
celulares requer um inrensificador para alcançar seu
nível usual de expressão; rambém não sabemos com
que freqüência um inrensificador corresponde a um
alvo de regulação. Alguns inrensificadores são ativados
somente nos tecidos onde seus genes acuam,
porém outros podem ser ativos em todas as células.
A metilação de DNA é um dentre vários eventos
regulatórios que influenciam a atividade de um
promotor. A metilação no promotor impede a
transcrição, e os grupos mecil devem ser removidos,
a fim de ativar um promotor. Este efeito está
bem caracterizado em promotores de RNA polimerase
I e RNA polimerase TI. De fato, a metilação
é um evento regulatório reversível. Esta é
desencadeada por modificações em hisronas que
incluem a desacetilação e a metilação protéica (ver
Seção 30.9, A Merilação de Histonas e do D NA
Estão Conectadas).
A merilação também ocorre como um evento
epigenético. Neste caso, a modificação pode ocorrer
especificameme no espermatozóide ou oócico,
resultando na possibilidade de haver uma diferença
enrre dois alelos na geração seguinre. Isto pode
resultar em diferenças na expressão dos alelos paterno
e materno (ver Seção 31.8, A Mecilação do
DNA é Responsável pelo lmprinting) .
Neste capítulo, estamos interessados nas formas
pelas quais a metilação influencia a transcrição,
a qual é a mesma, quer os grupos meril sejam
adicionados ou removidos na forma de um
evenro regularório local, ou como um evento
epigenético.
A metilação em promorores de RNA polimerase
II ocorre em duplas CG. A distribuição de
grupos metil pode ser examinada baseando-se nas
propriedades de enzimas de restrição que clivam
sítios-alvo comendo a dupla CG. Dois tipos de
atividade de restrição são comparadas na FIGURA
24.26. Estes isoesquizômeros são enzimas que
clivam a mesma seqüência-alvo no DNA, mas
respondem diferentemente a seu estado de merilação.
A enzima HpaH diva a seqüência CCGG (sendo
escrita a seqüência de somente uma fira de DNA). Se
o segundo C for meti lado, no entanto, a enzima não é
mais capaz de reconhecer o sítio. A enzima Mspl, no
entantO, diva o mesmo sítio-alvo independentemente
t.Lii:l A Expressão Gênica Está
Associada à Desmetilação
Conceito Essencial
• A desmetilação na extremidade s· do gene é necessária
para a transcrição.
Metilado
CCGG
Mspl
Não-metilado
CCGG
GGCC
O sítio não-metilado
é clivado
FIGURA 24.26 A enzima de restrição Mspi diva todas as seqüências
CCGG, quer estejam metiladas ou não no segundo C,
porém Hpaii diva somente tetrâmeros CCGG não-metilados.