Genes IX Benjamin Lewin - PortuguesBR

26.4 O SPUCING DO PRÉ-mRNA OCORRE ATRAVÉS DE UM LAÇO 673
se rer cuidado ao interpretar esses resultados, pois ainda
não dispomos de provas de que todos os intem1ediários
de fato originem mRNA maduro.
A conclusão geral sugerida por essa análise é que a
conformação do RNA influencia a acessibilidade aos
sítios de sp!icing. A medida que determinados íntrons
são removidos, a conformação é alterada, tornando
novos pares de sítios de splicing disponíveis. No entanro,
a capacidade do precursor remover seus ímrons
em mais de uma ordem sugere a existência de conformações
alternativas em cada estágio. Obviamente,
quanto maior a molécula mais opções estruturais tornam-se
disponíveis, e, quando consideramos genes
maiores, é difícil imaginar como estruturas secundárias
específica..~ poderiam controlar a reação. Esta análise
nos leva à importante conclusão de que a reação
não ocorre de forma seqüenciaL ao longo do precursor.
Um simples modelo de controle do reconhecimento
de sírios de spficing poderia ocorrer pela ação do
aparato de spficing de forma processiva. Após reconhecer
um sírio 5 ', o aparato poderia fazer a varredura
do RNA na direção adequada, até enconrrar o sítio
3' seguinte. Isto restringiria o splícing a sítios adjacentes.
Contudo, este modelo é excluído por experimentos
que demonstram que o spficing pode ocorrer em
trans, na forma de uma reação inrermolecular, em determinadas
circunstâncias (ver Seção 26.13, Reações
de Trans-splicing Uciliza.m Pequenos RNAs), ou em
moléculas de RNA nas quais parte da cadeia nucleorídica
é substituída por um ligador químico. Isto significa
que não deve haver a necessidade de uma estrita
varredura ao longo do RNA, do sírio de splicing 5'
para o sítio de spLicing 3 '. Outro problema com o modelo
de varredura é o Faro deste não explicar a existência
de padrões de spficing alrernarivo, nos quais (por
exemplo) um sírio 5' comum é ligado a mais de um
sítio 3'. A base do reconhecimento apropriado dos
pares corretos de spficing permanece ainda não compleramence
definida.
•••
O Splicing do Pré-m RNA
Ocorre através de um Laço
Conceitos Essenciais
• O splidng requer os sítios de splidng 5' e 3' e um sitio de
ramificação imediatamente a montante ao sítio de splicing r.
• A seqüência de ramificação é conservada em levedu ras
e menos conservada em eucariotos superiores.
• Um laço é formado quando o íntron é divado no sítio
de splicing 5' e a extremidade 5' é ligada à posição 2'
em um A no sítio de ramificação no íntron
• O intron é liberado como um Jaço quando é clivado no sítio
de splidng 3' e os éxons esquerdo e direito são unidos.
• As reações ocorrem por transesterificações, nas quais
uma ligação é transferida de um local para outro.
•
Sítio 5' Sítio 3'
5'---~~~~~-::-~--- 3'
GU UACUAAC AG
Pyao N PYao Py87 Pu75 A PYgs
Consenso animal
Clivagem no sítio 5' e formação do laço por uma ligação 5'-2'
conectando o 5'-G do lntron ao 2' do A no sítio de ramificação
5''----3'
~G
\....,._~..,. 1 5~·~~--- 3,
UACUAACAG
2'
Clivagem no sítio 3' e união dos éxons;
íntron liberado como um laço
~G
5'----3·\.1 5 '
UACUAAC AG
2'
5''--------3'
Linearização do íntron
5' GU
\.
UACUAAC AG 3'
3'5''----3'
Flú 6.6 O splidng ocorre em dois estágios. Inicialmente, o éxon
5' é clivado e, em seguida, ligado ao éxon 3'.
Os mecanismos de splicing foram caracterizados in vitro
empregando sistemas nos quais fnrrons podem ser
removidos de RNAs precursores. Exrraros nucleares podem
fuz.er o spficing de RNAs precursores purificados;
isto revela que a atividade de spficing não está ligada ao
processo de transcrição. O spficing pode ocorrer em
RNA~ sem capou não-poliadenilados. A reação de splicing
é independente da transcrição ou da modificação
do RNA; no entamo, estes eventos, em geral, ocorrem
de forma coordenada, e a eficiência do spfiâng pode ser
influenciada por outros eventos de processan1ento.
Os estágios do splicing in vitro estão ilustrados na
via da qGUR .b . Discutimos a reação em termos
de espécies individuais de RNA que podem ser idencilicadas,
porém lembre-se de que, in vivo, as espécies
contendo éxons não são liberadas como moléculas livres,
sendo mantidas juntas pelo aparato de spficing.
A primeira etapa corresponde à clivagem no sítio
de splicing 5 ', separando o éxon esguerdo e a
molécula de ínrron-éxon direira. O éxon esquerdo
assume a forma de uma molécula linear. A molécula
de íncron-éxon direita forma um la~, no qual a
terminação 5' gerada na t:xuemidade do íntron se