Genes IX Benjamin Lewin - PortuguesBR

26.6 A sn RNP Ul INICIA O SPUCING 617
sofre splicing apresenta duas modifiGiçõcs na seqüência;
os resíduos GG nas posições 5 a 6 no íntron são
trOGidos para AU. A mumção provOGI o padrão de pareamenro
entre o snRi"U\ U I e o sítio de splicing 5' ,
embora não altere a ext:ensão global do pareamemo (porque
a complementaridade é perdida em um local, mas
recuperada em outro). O efeito no splícing sugere que a
interação de pareamemo de bases é imporrame.
Quando uma mutação é introduzida em um snR­
NA Ul, restaurando o pareamcnco nas posições 5', o
splicing normal é restabelecido. Outros casos, nos quais
rnuraçõcs correspondenres são introduzidas no snRNA
U I para verificar-se se estas podem suprimir a mutação
no sítio de splidng, sugerem que, como regra geral: a
complementaridade enrre o snRNA UI e o sítio de
splicing 5' é necessária ao splicing, embora a eficiência
desce não seja determinada somente pelo número de
pares de bases capa1.es de serem formados. A reação de
parcarnento é estabilizada por prmeínas da snR..'\ P U 1.
A U aprcsen ra os esr.ágios iniciais do splicütg.
O primeiro complexo formado duranre o splicing
é denominado complexo E (pré-splicing inicial; onde a
sigla E indica inicial; do ingl~. early), o qual contém a
snRNP Ul, o furor de splicing U2AF e membros de
uma fàmília denominada proteínas SR, que compreende
um importante grupo de Fatores e reguladores de
splicing. A denominação SR é decorrente da presença,
nesms proteínas, de uma região riGI en1 Arg-Ser, de extensão
variável. A~ proreú1as SR interagcm entre si por
meio das regiões ricas em Arg-Ser. Estas são cambém
capazes de ligar-se ao RNA. Tais prmeínas são um componente
essencial do spficeossomo, formando wn esqueleto
no substrato de RNA. Esras conectam U2AF a U 1
( UR 2 ). O complexo E é algumas ve:z.es denominado
complexo de comprometimento, uma vez que
sua formação identifica um pré-mRNA como substrato
para a formação do complexo de splicing.
No complexo E, U2AF esrá ligada à região entre o
sítio de ramifiGição e o sítio de splicing 3 '. A designação
U2AF reAecc seu isolamento inicial, sendo caracterizada
como um fàcor auxiliar de U2. Na maioria
dos organismos, esta apresenm uma subunidade grande
(U2AF65) que csmbelece contato com um segmento
de pirimidinas localizado a jlL~anre ao sício de ramificação;
uma subunidade pequena (U2AF35) realiza
conmro direto com o dinuclcorídeo AG, no sítio de
splicing 3 '. Em Snccharomyces cerevisiae, esta função é
realizada pela proLefna Mud2, que corresponde a um
equivalente de U2AF65 e que se liga apenas ao segmento
de pirimidinas. Isto ressalm uma diferença no
mecanismo de splicing entre S. cerevisü1e e outros organismos.
Na levedura, o sírio de splicing 3' não está
envolvido nos estágios iniciais de formação do complexo
de splicing, porém cal sírio é requerido por rodos
os demais casos conhecidos.
Outro fator de splicing, denominado SFl em mamíferos
e BBP em levedura, conecta U2AF/Mud2 à
snR P Ul ligada no si cio de splicing 5 ' . A formação
do complexo é intensificada pelas reações cooperativas
das duas protefnas; SF I e U2AF (ou BBP e Mud2)
ligam-se juntos ao substrato de RNA com - 1 O x mais
eficiência que cada wna isoladamente. Provavelmente,
es-ra interação é responsável pelo estabelecimento
da primeira conexão entre os dois sírios de splicing
através do ínuon.
O complexo E é convertido em complexo A
quando a snRNP U2 se liga ao sírio de ramificação.
Ambas, snRNP U l c U2AF/Mud2, são necessárias
à ligação de U2. O snRNA U2 inclui seqüências
complementares ao sítio de ramificação. Uma
seqüência próxima à extremidade 5' do snRNA pareia-se
com a seqüência de ramificação no íncron.
o SnRNA U1 seleciona a· junçã~ de splíélng dc;ado~a -
Splicing normal
o
ANA U1 selvagem e pré-mANA 125
3'
5'
5 ' xon G U G A G G lntron 3'
Sftio de splicing do 12S de adenovírus
snRNA U1 selvagem e pré-mANA 125 mutante
Ausência de spllclng
soRNA U1 mutante e RNA 125 mutante
Splicing restaurado
o l
3'
g
Mutação no snRNA U1
oo= '\~A .U~- 5 '
fJ Exon G U G A A U Íntron 3'
8
FTGU~ O Mutações que abolem a função do sitio de splicing 5'
podem ser suprimidas por mutações compensatórias no snRNA Ul
que restauram o pareamento de ba ses.