Estudo do polimorfismo do sistema sangüíneo Diego em

5.4- Fenotipagem Eritrocitária
Material e Métodos
A fenotipagem eritrocitária foi realizada no laboratório de Imuno-hematologia
do Hemocentro de Ribeirão Preto utilizando-se a técnica de “gelteste”. A amostra para
teste foi a mesma disponibilizada na rotina do laboratório para realização da
fenotipagem estendida de doadores (um tubo com anticoagulante EDTA).
Foram utilizados:
ID-Cartão LISS/COOMBS (DiaMed) contendo 6 microtubos cada um
contendo soro antiglobulina humana poliespecífico suspenso em gel.
Soro policlonal anti-Di a (Gama).
5.4.1- Padronização do soro anti-Di a
Foi realizada a padronização do soro anti-Di a para viabilizar sua utilização na
técnica em gel, originalmente disponível para técnica em tubo. Para tal, foram
realizadas diluições seriadas do soro, utilizando-se ID-Diluente 2. Estas foram testadas
com 3 hemácias sabidamente Di a positivo em uma suspensão de hemácias a 0,1%. Foi
considerada diluição desejável aquela na qual a intensidade de aglutinação apresentou-
se igual ou superior a 3+ (figura 10). A diluição de 1:8 foi escolhida quando da
utilização do soro anti-Di a lote DIA 28-A e 1:4 lote DIA – 29-A.
5.4.2- Pesquisa do Antígeno Di a
Foi preparada uma suspensão de hemácias em uma concentração de 0,1%
preparada em ID-Diluente 2 à temperatura ambiente, através da utilização de 1,0 mL de
ID-Diluente 2 em um tubo e 10 L de concentrado de hemácias ou 20 L do sangue
total da amostra de interesse, com posterior homogeneização delicada.
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