Estudo do polimorfismo do sistema sangüíneo Diego em

Material e Métodos
Foram adicionados, ao ID-Cartão, após devida identificação da amostra no
cartão, 50 L da suspensão homogeneizada de hemácias da amostra de interesse e 50
L do soro anti-Di a . O ID-Cartão em seguida foi incubado a 37 C por 15 minutos na
incubadora específica (ID-Incubadora). Após incubação, o cartão foi centrifugado por
10 minutos na ID-Centrífuga e realizada leitura da reação. Considera-se reação positiva
aquela em que as hemácias, como um todo, ficam retidas na parte superior do gel ou
parte delas percorrem a extensão do gel. Por outro lado, uma reação negativa é aquela
em que todas as hemácias se mantêm no fundo do gel (figura 10).
4+ 3+ 2+ 1+ 0
Figura 10: Representação da técnica de gel com suas diferentes intensidades de
aglutinação. O primeiro e o segundo microtubos (4+ e 3+) ilustram as diluições
com as respectivas intensidades de aglutinação escolhidas para realização da
fenotipagem eritrocitária, no presente estudo.
5.5- Obtenção e Armazenamento das Células
As amostras de sangue contendo anticoagulante foram separadas do plasma
através de centrifugação a 2000 rpm por 10 minutos a 4ºC. O plasma foi descartado
sendo o buffy-coat aspirado e transferido para tubos de polipropileno de 15 mL e
armazenado a -20ºC.
5.6- Extração e Quantificação do DNA
O DNA foi extraído a partir do buffy-coat, utilizando o kit para extração “Super
Quick Gene DNA Isolation” (Analytical Genetic Testing Center - AGTC, Denver,
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