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Estudo do polimorfismo do sistema sangüíneo Diego em

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Colora<strong>do</strong>, USA), de acor<strong>do</strong> com a especificação <strong>do</strong> fabricante.<br />

Material e Méto<strong>do</strong>s<br />

O DNA extraí<strong>do</strong> foi homogeneiza<strong>do</strong> e após dissolução completa, diluí<strong>do</strong> <strong>em</strong><br />

água Milli-Q e quantifica<strong>do</strong> por espectrofotometria ultravioleta nos comprimentos de<br />

onda de 260 e 280 nm.<br />

5.7- Reação <strong>em</strong> Cadeia de Polimerase (PCR)<br />

Para amplificação das regiões genômicas de interesse <strong>do</strong> gene SLC4A1 (exons 4,<br />

11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 e 20), foi utilizada a técnica de reação <strong>em</strong> cadeia<br />

catalisada pela taq polimerase (PCR), de acor<strong>do</strong> com o princípio descrito. (SAIKI et al,<br />

1985, 1988; MULLIS & FALOONA, 1987).<br />

Foram amplificadas as regiões genômicas referentes aos exons 4, 11, 12, 13, 14,<br />

15, 16, 17, 18, 19 e 20 através da utilização de oligonucleotídeos inicia<strong>do</strong>res da reação<br />

(primers) específicos para cada uma destas regiões. Os primers foram defini<strong>do</strong>s a partir<br />

da seqüência <strong>do</strong> “GenBank accession number”: X77738 e L35930, de acor<strong>do</strong> com a<br />

tabela 3.<br />

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