Estudo do polimorfismo do sistema sangüíneo Diego em

Material e Métodos
Figura 22: Sítio de restrição onde a enzima Apo 1 reconhece o polimorfismo
G>A posição 1770 do gene. Diante da mutação a enzima corta o produto
amplificado do exon 14 em 2 bandas de 190 e 83 pares de base quando em
homozigose e 3 bandas de 273, 190 e 83 pares de base quando em heterozigose.
Para identificação do polimorfismo A>G posição 166 (Lys56-Glu) responsável
pela determinação da banda Memphis, o produto de amplificação do exon 4 foi digerido
a 37ºC por duas horas com a enzima de restrição Mnl I (New England Biolab , MBI
Fermentas , Amherst, NY) em um volume final de 20,7 L, utilizando 10 L da
mistura de enzima/tampão, de acordo com o protocolo recomendado pelo fabricante. A
análise dos fragmentos obtidos com a digestão enzimática foi realizada após corrida
eletroforética em gel de agarose a 4%. A presença do polimorfismo da banda Memphis,
quando da utilização desta enzima, gera 2 bandas de 57 e 27 pb, pois a enzima
reconhece a seqüência complementar do codon 56 GAG (CCT). Na ausência do
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