Untersuchungen zum Argininstoffwechsel bei Mycobacterium bovis ...

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118 Nährmedien Middlebrook 7H9-Flüssigmedium mit ADS (1000ml) 4,7 g Middlebrook 7H9 wurden in 900 ml dest. H2O gelöst und nach Zugabe von 100 ml Albumin Dextrose Salz (ADS), 2,5 ml 20% Tween80 und 10 ml 50 % Glycerin sterilfiltriert. Middlebrook 7H9-Flüssigmedium mit OADC (1000ml) 4,7 g Middlebrook 7H9 wurden in 960 ml dest. H2O gelöst und nach Zugabe von 40 ml Middlebrook OADC, 2,5 ml 20% Tween80 und 10 ml 10% Glycerin sterilfiltriert. Middlebrook 7H10-Agar mit ADS (1000ml) 19 g Middlebrook 7H10 wurden in 900 ml dest. H2O gelöst und autoklaviert. Nachfolgend wurde der Nährboden auf 50 °C abgekühlt und 100 ml ADS sowie 10 ml 50% Glycerin hinzugefügt. Dann wurde der Nährboden in Portionen zu je 25 ml in Petrischalen gegossen. Middlebrook 7H10-Agar mit OADC (1000ml) 19 g Middlebrook 7H10 wurden in 960 ml dest. H2O gelöst und autoklaviert. Nachfolgend wurde der Nährboden auf 50 °C abgekühlt und 40 ml OADC sowie 10 ml 50 % Glycerin hinzugefügt. Dann wurde der Nährboden in Portionen zu je 25 ml in Petrischalen gegossen. Wahlweise wurden 920 ml dest. H2O verwendet und 40 ml 50 % Sucroselösung hinzugefügt, um eine Sucrosekonzentration von 2 % im Medium zu erreichen ADS (Albumin Dextrose Natriumchlorid) 8,1 g Natriumchlorid, 50 g Rinderalbumin und 22 g D-Glucose-Monohydrat wurden in 950ml dest. H2O gelöst und unter Verwendung einer Sterilfiltrationseinheit gefiltert. Mykobakterien-Basalsalz-Medium (MB-Medium) für langsam wachsende Mykobakterien (1000 ml) 100 ml Basissalz-Lösung, 2 ml Spurenelementlösung, 10 ml 50 % Glycerin, 2,5 ml 20% Tween80, 0,5 ml 1 mol/l MgCl2-Lösung und 0,5 ml 1 mol/l CaCl2-Lösung wurden in 885 ml dest. H2O gegeben, gerührt und durch eine Sterilfiltrationseinheit gefiltert. Bei Bedarf wurden 785 ml dest H2O verwendet und 100 ml ADS hinzugefügt.
119 Basissalz-Lösung ohne Stickstoffquelle für MB-Medium (1000ml) 10 g KH2PO4, 25 g Na2HPO4 und 20 g K2SO4 wurden schrittweise in 950 ml dest. H2O gelöst und sterilfiltriert. Spurenelementlösung für MB-Medium 40 mg ZnCl2, 200 mg FeCl3x6H2O, 10 mg CuCl2 x 4H2O, 10 mg MnCl2 x 4H2O, 10 mg Na2B4O7 x 10H2O, 10 mg (NH4)6Mo7O24 x 4H2O wurden in 1000 ml destilliertem Wasser gelöst und sterilfiltriert. LB-Bouillon 20 g Lennox-Broth-Base wurden in 1000 ml dest H2O gelöst und autoklaviert. Tabelle 6: Chemikalien Substanz Firma Best.-Nr. Agarose Seakem LE Biozym, Hessisch-Oldendorf 840004 Ammoniummolybdat-tetrahydrat Fluka Chemie, Buchs, Schweiz 9880 L-Arginin Sigma, Steinheim A5006 L-Arginin-HCl Sigma, Steinheim A5131 Bovine Albumin Fraktion V Appli Chem, Darmstadt A1391.0500 L-Citrullin Sigma, Steinheim C7629 Diethylether Merck, Darmstadt 100-921 Di-Natriumhydrogen-Phosphat- Heptahydrat Sigma Chemical, St. Louis, USA S9390 Eisen(III)chlorid-hexahydrat Merck, Darmstadt 103-943 Ethanol MHH Bestand, Hannover Ethidiumbromid Gibco BRL, Langley, USA 15585-011 EDTA Sigma, Steinheim E6758 Glycerol Merck, Darmstadt 1040931000 D-Glucose Sigma, Steinheim G5400 Hygromycin Roche, Mannheim 843555
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Aus dem Institut für Mikrobiologie
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Inhaltsverzeichnis Inhaltsverzeichn
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5. Diskussion 89 5.1. In-vitro-Char
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VI SDS Sodiumdodecylsulfat sec seco
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2 Energiequelle genutzt. Mycobacter
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4 Mykobakterien hat ihnen auch zu i
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6 mit einer unbehandelten Tuberkulo
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8 progressive Primär-Tuberkulose d
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10 2001). Diese ist der Ausdruck ei
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12 Niacin zu Nicotinsäuremononukle
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14 überprüft, bis er schließlich
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16 Eutertuberkulose. Unter zusätzl
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18 So können sie noch Jahre nach d
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20 berichtet von Pseudomonas spp.,
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22 Tabelle 2: Verwendete Bakteriens
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24 2M TRIS-HCl pH7,5 242,28 g TRIS(
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26 3.2. Methoden 3.2.1. Anzucht von
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28 einem weiteren Zentrifugationssc
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30 Das in dieser Arbeit verwendete
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32 3.2.9. Kultivierung der Mykobakt
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34 3.2.11. Nitratreduktase-Test Die
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36 17,03 x ber. Extinktionskoeffizi
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38 3.3.6. Bestimmung der Keimdichte
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40 führt. Nach einer Gegenfärbung
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42 Wachstum (OD 600 ) 1,4 1,2 1,0 0
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44 von 10 mM Arginin mit einer Star
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46 Ammoniakgehalt in mmol/l 1,4 1,2
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48 Ammoniakgehalt in mmol/l 0,30 0,
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50 4.2. Untersuchung des Argininsto
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52 Wachstum (OD 600 ) 2,0 1,5 1,0 0
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60 4.3.1. Aerobe Bedingungen 4.3.1.
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66 4.4. Vergleich von ∆arcA BCG m
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Seite 80 und 81: Tag 60 post infectionem BCG ∆arcA
Seite 82 und 83: 74 4.4.3.2. Histologische Beurteilu
Seite 84 und 85: Tag 290 post infectionem BCG ∆arc
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Seite 90 und 91: 82 Abbildung 36: Southern Blot-Hybr
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Seite 94 und 95: 86 Ammoniakgehalt in mmol/l 0,30 0,
Seite 97 und 98: 5. Diskussion Nach einer aerogenen
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Seite 101 und 102: Die weiteren Schritte des Argininab
Seite 103 und 104: Lebern ab Tag 200 und in den Lungen
Seite 105: immunkompetenten BALB/c-Mäusen att
Seite 108 und 109: 100 Ergebnisse, dass die durch arcA
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Seite 112 und 113: 104 BRENNAN, P. J. (2003): Structur
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Seite 135: Tabellenverzeichnis Tabelle 1: Verw
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