Untersuchungen zum Argininstoffwechsel bei Mycobacterium bovis ...

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II 3.2.11. Nitratreduktase-Test...........................................................................................34 3.2.12. Ammoniaktest.....................................................................................................34 3.3. Tierexperimente.........................................................................................................36 3.3.1. Anzucht und Aufbereitung des Infektionsmaterials ..............................................36 3.3.2. Infektion der Versuchstiere...................................................................................36 3.3.3. Haltung der Versuchstiere....................................................................................37 3.3.4. Tötung und Sektion der Versuchstiere .................................................................37 3.3.5. Aufarbeitung des Sektionsmaterials.....................................................................37 3.3.6. Bestimmung der Keimdichte in den Organen.......................................................38 3.3.7. Herstellung von Paraffinschnitten.........................................................................38 3.3.8. Ziehl-Neelsen-Färbung.........................................................................................39 4. Ergebnisse 41 4.1. Untersuchung des Argininstoffwechsels bei M. tuberculosis und BCG .............41 4.1.1. Aerobe Bedingungen............................................................................................41 4.1.1.1. Assimilation von Arginin ................................................................................41 4.1.2. Anaerobe Bedingungen........................................................................................43 4.1.2.1. Assimilation von Arginin ................................................................................43 4.1.2.2. Desaminierung von Arginin und Citrullin .......................................................44 4.2. Untersuchung des Argininstoffwechsels bei ∆arcA M. tuberculosis und ∆arcA BCG........................................................................................................................50 4.2.1. Aerobe Bedingungen............................................................................................50 4.2.1.1. Wachstum in Vollmedium ..............................................................................50 4.2.1.2. Assimilation von Arginin ................................................................................52 4.2.2. Anaerobe Bedingungen........................................................................................54 4.2.2.1. Desaminierung von Arginin und Citrullin .......................................................54 4.3. Komplementation von ∆arcA M. tuberculosis und ∆arcA BCG............................59 4.3.1. Aerobe Bedingungen............................................................................................60 4.3.1.1. Assimilation von Arginin ................................................................................60 4.3.2. Anaerobe Bedingungen........................................................................................61 4.3.2.1. Desaminierung von Arginin und Citrullin .......................................................61 4.4. Vergleich von ∆arcA BCG mit BCG in BALB/c-Mäusen ........................................66 4.4.1. Quantitative Analyse der Keimdichte von BCG und ∆arcA BCG in den Organen von BALB/c-Mäusen ...........................................................................................66 4.4.1.1. Keimdichte in der Lunge................................................................................66 4.4.1.2. Keimdichte in der Leber.................................................................................67 4.4.1.3. Keimdichte in der Milz ...................................................................................68 4.4.2. Klinische und pathologisch-anatomische Befunde...............................................69 4.4.3. Pathologisch-histologische Organbefunde...........................................................70 4.4.3.1. Histologische Beurteilung der Lunge.............................................................70 4.4.3.2. Histologische Beurteilung der Leber..............................................................74 4.4.3.3. Histologische Beurteilung der Niere ..............................................................77 4.5. Erstellung einer ∆narG ∆arcA Doppelmutante in M. tuberculosis .......................79 4.5.1. Transformation und homologe Rekombination.....................................................80 4.5.2. Entfernung des Wildtypgens und Überprüfung der Mutanten ..............................82 4.5.3. Untersuchung der Doppelmutante ∆narG ∆arcA M. tuberculosis ........................84 4.5.3.1. Anaerobe Bedingungen.................................................................................84 4.5.3.1.1. Desaminierung von Arginin und Citrullin.................................................84 4.5.3.1.2. Nitratreduktaseaktivität ...........................................................................86
5. Diskussion 89 5.1. In-vitro-Charakterisierung der ∆arcA-Mutanten .....................................................90 5.1.1. Aerobe Bedingungen............................................................................................90 5.1.2. Anaerobe Bedingungen........................................................................................92 5.2. In-vivo-Charakterisierung der ∆arcA-Mutante........................................................94 5.3. Die ∆narG ∆arcA Doppelmutante ............................................................................96 6. Zusammenfassung 99 7. Summary 101 8. Literaturverzeichnis 103 Anhang 117 Abbildungsverzeichnis 125 Tabellenverzeichnis 127 Danksagung 129 III
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Tag 60 post infectionem BCG ∆arcA
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82 Abbildung 36: Southern Blot-Hybr
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5. Diskussion Nach einer aerogenen
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unter aeroben Bedingungen durch die
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Die weiteren Schritte des Argininab
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Lebern ab Tag 200 und in den Lungen
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100 Ergebnisse, dass die durch arcA
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102 points out that the enzymes Arc
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104 BRENNAN, P. J. (2003): Structur
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106 D'HOOGHE, I., C. VANDER WAUVEN,
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108 Infectious Diseases, Vol. 1, Lo
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110 MANABE, Y. C. u. W. R. BISHAI (
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112 PETEROY-KELLY, M. A., V. VENKET
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114 STERMANN, M. (2003): Der moleku
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116 WHO (2004a): Tuberculosis Fact
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118 Nährmedien Middlebrook 7H9-Fl
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120 Isoamylalkohol Fluka-Sigma, See
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122 Tabelle 9: Verbrauchsmaterialie
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Abbildungsverzeichnis Abbildung 1:
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Tabellenverzeichnis Tabelle 1: Verw
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