Untersuchungen zum Argininstoffwechsel bei Mycobacterium bovis ...

4.3. Komplementation von ∆arcA M. tuberculosis und ∆arcA BCG
Als nächstes sollte überprüft werden, ob eine Wiederherstellung des Phänotyps von
BCG und M. tuberculosis bei den ∆arcA-Mutanten mittels Komplementation mit dem
arcA-Gen erreicht werden konnte. Hierzu wurde das Plasmid pCR5 verwendet, das
aus einer vorangegangenen Arbeit stammt (RÖHKER 2003). Es trägt als integrativer
Vektor ein vollständiges arcA-Gen aus M. tuberculosis und eine Kanamycin-
Resistenzkassette (Abb. 18).
-1
-2
ArcA
6000
7000
5000
pCR5
7998 bps
Abbildung 18: Konstrukt pCR5 zur Komplementation der ∆arcA-Mutanten
'+1
Dieses Konstrukt wurde in ∆arcA M. tuberculosis und ∆arcA BCG transformiert. Um
zu gewährleisten, dass das Plasmid nicht aus den Mutanten eliminiert wird, wurden
sie danach mit dem entsprechenden Kanamycin-Zusatz inkubiert.
4000
1000
3000
2000
oriE
int
aph
59