Untersuchungen zum Argininstoffwechsel bei Mycobacterium bovis ...

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17,03 x ber. Extinktionskoeffizient
2100 x Probevolumen
=
Ammoniakgehalt
in g/l
Ammoniakgehalt in g/l x 0,001 = Ammoniakgehalt in mg/l
Ammoniakgehalt in mg/l ÷ 0,01703 mg/mmol = Ammoniakgehalt in mmol/l
3.3. Tierexperimente
3.3.1. Anzucht und Aufbereitung des Infektionsmaterials
Das Infektionsmaterial (M. bovis BCG, ∆arcA M. bovis BCG) wurde in 50 ml 7H9-
Medium in Rollflaschen bei einer Temperatur von 37 °C bis zu einer OD600 von 1,0
inkubiert. In Portionen zu je 1 ml wurde die Kultur in Eppendorf-Gefäße gegeben und
für 2 Tage bei -70 °C eingefroren. Nach Ablauf dieser Zeit wurden die Kulturen auf
Eis aufgetaut und für 3 x 45 Sekunden in einem Ultraschallbad behandelt, wobei
zwischen den einzelnen Schritten 1 min Pause gelassen wurde. Dieser Schritt führt
zu einer Trennung eventuell aggregierter Bakterien. Nun konnte eine
Keimdichtenbestimmung mit Hilfe von Verdünnungsreihen erfolgen, die auf 7H10-
Platten ausgestrichen wurden.
Die Einstellung der Lebendkeimzahl des portionierten Infektionsmaterials auf 1 x 10 6
koloniebildende Einheiten erfolgt durch PBS-Gebrauchslösung.
3.3.2. Infektion der Versuchstiere
Die Infektion der Versuchstiere erfolgte durch eine Injektion von 200 µl
Bakteriensuspension (entspricht 1 x10 6 KBE) in die Schwanzvene. Die Tiere wurden
5- 10 min. mit einer Rotlichtlampe bestrahlt, damit sich die Schwanzvene besser
darstellt. Sie wurden in einen Metalltrichter gelegt, durch den der Schwanz fixiert
werden konnte, um die Injektion zu erleichtern.