Untersuchungen zum Argininstoffwechsel bei Mycobacterium bovis ...

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3.3.6. Bestimmung der Keimdichte in den Organen
Die Bestimmung der Keimdichte in den Organen erfolgte über abgestufte
Verdünnungsreihen. Dabei reichten die Verdünnungsstufen von 10 0 – 10 7 . In
Eppendorf-Gefäßen wurden 900µl 7H9-Medium vorgelegt, 100 µl der
vorausgegangenen Verdünnungsstufe dazupipettiert und kräftig durchmischt. 50 µl
jeder Verdünnungsstufe wurden schließlich auf je eine Hälfte einer 7H10-OADC-
Agarplatte aufgetropft und mit Kunststoff-Impfschlingen ausgestrichen. Die
Agarplatten wurden zum Schutz gegen Austrocknung in Aluminiumfolie eingewickelt
und für mindestens drei Wochen im Brutschrank bei 37 °C inkubiert.
Das Volumen der Organhomogenisate betrug für die Organe:
• Milz 1,2 ml
• Leber 1,5 ml
• Niere 1,2 ml
• Lunge 1,2 ml
• Gehirn 1,2 ml
Die Zahl der koloniebildenden Einheiten in den Organen ließ sich also auf folgende
Weise berechnen:
gezählte Kolonien
x Organvolumen
Verdünnungsstufe
x ausgestrichenes
Volumen
3.3.7. Herstellung von Paraffinschnitten
= KBE/Organ
Die formalin-fixierten Organe wurden auf Kapseln verteilt. Im Institut für Pathologie
der Medizinischen Hochschule Hannover wurden die Organe weiterbehandelt und
Paraffinschnitte hergestellt. Die Kapseln wurden in ein Gewebeeinbettungsgerät
eingehängt und in einem automatisierten Verfahren behandelt.