1 - EUR-Lex

21.8.2001 L 225/167
Journal officiel des Communautés européennes
FR
prise dans un intervalle de ± 10 % de la moyenne arithmétique et en aucun cas excéder 25 %. Il est recommandé
de peser un sous-échantillon de poissons avant l'essai afin d'estimer le poids moyen.
Les poissons doivent être privés de nourriture pendant les 24 heures qui précèdent le début de l'essai. Ils sont
ensuite choisis au hasard. À l'aide d'un anesthésique général [par exemple, une solution aqueuse de 100 mg/litre
de méthanesulphonate de tricaïne (MS 222) neutralisée par l'adjonction de deux parts de bicarbonate de
sodium par part de MS 222], les poissons doivent être pesés individuellement en poids frais (blotted dry, poissons
essuyés) avec la précision indiquée à l'appendice 1. Les poissons dont le poids se situe à l'intérieur de l'intervalle
voulu seront retenus puis répartis au hasard entre les récipients d'essai. On notera le poids frais (wet
weight) total des poissons dans chaque récipient. L'utilisation d'anesthésique de même que la manipulation des
poissons (y compris le séchage et la pesée) peuvent stresser et blesser les jeunes poissons, en particulier les
espèces de petite taille. Les juvéniles doivent donc être manipulés avec la plus grande précaution afin d'éviter
de stresser et de blesser les animaux testés.
Les poissons sont pesés à nouveau le 28 e jour de l'essai (voir point 1.8.6). Si toutefois on juge nécessaire de
recalculer la ration alimentaire, on pèsera à nouveau les poissons au 14 e jour de l'essai (voir point 1.8.2.3). On
pourra recourir à une autre méthode telle que la technique photographique par exemple pour évaluer les
variations de taille des poissons à partir de quoi la ration alimentaire pourra être ajustée.
1.8.2. Conditions d'exposition
1.8.2.1. Durée
La durée de l'essai est de Å 28 jours.
1.8.2.2. Taux de charge et densité de peuplement
Il importe que le taux de charge et la densité soient adaptés à l'espèce testée (voir appendice 1). Si la densité
de peuplement est trop élevée, le stress engendré par la surpopulation entraînera une diminution des taux de
croissance, et probablement la maladie. Si elle est trop faible, elle peut induire un comportement territorial
susceptible d'affecter également la croissance. En tout état de cause, le taux de charge doit être suffisamment
bas pour que la concentration de l'oxygène dissous puisse être maintenue à au moins 60 % de la valeur de
saturation en air, sans aération. Un essai tournant (3) a montré que, dans le cas de la truite arc-en-ciel, un taux
de charge de 16 truites de 3 à 5 grammes dans un volume de 40 litres était acceptable. La fréquence de renouvellement
de l'eau recommandée durant l'essai est de 6 litres/g de poissons par jour.
1.8.2.3. Alimentation
Les poissons doivent recevoir une alimentation adéquate (voir appendice 1) en quantité suffisante pour permettre
un taux de croissance acceptable. Il faut veiller à éviter la prolifération microbienne et la turbidité de
l'eau. Dans le cas de la truite arcen-ciel, une ration quotidienne de 4 % de son poids corporel par jour devrait
remplir ces conditions (3) (16) (17) (18). La ration quotidienne peut être divisée en deux parts égales et administrée
aux poissons en deux fois, à au moins 5 heures d'intervalle. La ration est fonction du poids total initial
des poissons dans chaque récipient d'essai. Si les poissons sont pesés à nouveau le 14 e jour, on recalcule la
ration. Les poissons doivent être privés de nourriture pendant les 24 heures qui précèdent leur pesée.
Les aliments non consommés et les matières fécales doivent être enlevés quotidiennement des récipients d'essai
par un nettoyage soigneux du fond de chaque récipient à l'aide d'un suceur.
1.8.2.4. Lumière et température
La photopériode et la température de l'eau d'essai doivent être adaptées à l'espèce testée (voir appendice 1).
1.8.3. Concentrations d'essai
On doit normalement utiliser cinq concentrations de la substance d'essai, quelle que soit la conception de l'essai
(voir point 1.7.2). Une connaissance préalable de la toxicité de la substance d'essai (tirée par exemple d'un
essai de toxicité aiguë et/ou d'études de détermination de l'ordre de grandeur) devrait faciliter le choix des
concentrations d'essai adéquates. L'utilisation de moins de cinq concentrations doit être justifiée. La concentration
d'essai la plus élevée ne doit pas dépasser la limite de solubilité de la substance dans l'eau.