1 - EUR-Lex

21.8.2001 L 225/249
Journal officiel des Communautés européennes
FR
1.8. MODE OPÉRATOIRE
1.8.1. Conditions d'exposition
1.8.1.1. Durée
1.8.1.2. Charge
L'essai dure 21 jours.
Les animaux parents sont répartis individuellement dans les récipients d'essai contenant chacun 50-100 ml de
milieu.
Il est parfois nécessaire d'avoir recours à des volumes plus importants afin de pouvoir appliquer la méthode
d'analyse utilisée pour déterminer la concentration de la substance d'essai, bien qu'il soit aussi possible de
mélanger les récipients de même concentration aux fins de l'analyse chimique. Si des volumes supérieurs à
100 ml sont employés, il faudra peut-être augmenter la ration distribuée aux Daphnia, afin que la nourriture
disponible soit suffisante et que les critères de validité soient satisfaits. S'agissant des essais dynamiques,
d'autres protocoles peuvent être envisagés pour des raisons techniques (par exemple, 4 groupes de 10 animaux
dans des volumes expérimentaux plus élevés), mais toute modification du mode opératoire doit être
signalée.
1.8.1.3. Nombre d'animaux
Pour les essais semi-statiques, on utilisera au moins 10 animaux répartis individuellement à chaque concentration
d'essai et au moins 10 animaux répartis individuellement dans la série de témoins.
Pour les essais dynamiques, il s'avère approprié d'utiliser 40 animaux répartis en 4 groupes de 10 à chaque
concentration d'essai (1). Un plus petit nombre d'animaux d'expérience peut être utilisé, mais on recommande
d'employer au moins 20 animaux par concentration, répartis dans au moins 2 récipients contenant le même
nombre d'animaux (par exemple, 4 récipients contenant 5 daphnies chacun). Notons que pour les essais où
les animaux sont maintenus en groupe, il ne sera pas possible d'exprimer la capacité reproductrice en fonction
du nombre total de descendants vivants produits par animal parent survivant à la fin de l'essai, si des animaux
parents meurent. Auquel cas, il faudra exprimer la capacité reproductrice par «le nombre total de descendants
vivants produits par parent présent au début de l'essai».
1.8.1.4. Alimentation
1.8.1.5. Lumière
Dans les essais semi-statiques, on préconise d'administrer une ration quotidienne, ou au moins tri-hebdomadaire
(ce qui correspond au renouvellement du milieu). Les écarts par rapport à cette fréquence (par exemple,
dans les essais dynamiques) doivent être signalés.
Au cours de l'essai, le régime alimentaire des animaux parents devrait, de préférence, se composer d'algues
unicellulaires vivantes appartenant à une ou plusieurs des espèces suivantes: Chlorella sp., Selenastrum capricornutum
[renommée Pseudokirchneriella subcapitata (11)] et Scenedesmus subspicatus. La nourriture devrait être dispensée
en fonction de la teneur en carbone organique (C) fournie à chaque animal parent. La recherche (12) a
montré que pour Daphnia magna, des teneurs comprises entre 0,1 et 0,2 mg de C/Daphnia/jour dans la ration
alimentaire suffisaient pour produire le nombre de descendants requis selon les critères de validité. On peut
fournir des rations à teneur constante tout au long de l'essai ou utiliser des teneurs plus faibles au début, que
l'on augmentera afin de tenir compte de la croissance des animaux parents. Dans ce cas, la ration devrait toujours
contenir entre 0,1 et 0,2 mg de C/Daphnia/jour, qui est la teneur recommandée.
Si des paramètres de remplacement, comme le nombre de cellules d'algues ou l'absorbance de la lumière, sont
utilisés pour doser la teneur en carbone requise dans la ration alimentaire (pour des raisons pratiques, car la
mesure de la teneur en carbone prend beaucoup de temps), chaque laboratoire est tenu de produire son
propre nomogramme mettant en relation le paramètre de remplacement et la teneur en carbone de la culture
d'algues (des conseils concernant l'établissement d'un nomogramme sont donnés à l'appendice 2). Les nomogrammes
devraient être vérifiés au moins une fois par an, et plus souvent si les conditions de culture des
algues ont changé. Il a été démontré que l'absorbance de la lumière donne une meilleure indication de la
teneur en carbone que le nombre de cellules (13).
Il convient d'administrer une suspension d'algues concentrée aux Daphnia, afin de réduire au minimum le
volume du milieu de culture des algues transféré dans les récipients d'essai. On peut concentrer les algues par
centrifugation, puis remise en suspension dans de l'eau distillée, de l'eau désionisée ou le milieu de culture des
Daphnia.
16 heures de lumière à une intensité ne dépassant pas 15-20 lE ·m -2 ·s -1 .