1 - EUR-Lex

21.8.2001 L 225/177
Journal officiel des Communautés européennes
FR
Les informations sur la substance d'essai qui peuvent être utiles pour établir les conditions de l'essai comprennent
la formule structurale, la pureté de la substance, la stabilité à la lumière, la stabilité dans les conditions de
l'essai, le pKa, le coefficient de partage n-octanol/eau (P oe) et les résultats d'un essai de biodégradabilité immédiate
(voir méthode C.4).
1.5. VALIDITÉ DE L'ESSAI
La validité de l'essai repose sur les conditions suivantes:
— le taux global de survie des œufs fécondés dans les groupes témoins et, s'il y a lieu, dans les récipients ne
contenant que le solvant, doit être supérieur ou égal aux limites définies dans les appendices 2 et 3,
— la concentration de l'oxygène dissous doit se situer entre 60 et 100 % de la valeur de saturation en air tout
au long de l'essai,
— à aucun moment au cours de l'essai, la température de l'eau ne doit varier de plus de ± 1,5 °C entre les
différentes enceintes expérimentales ou entre deux jours consécutifs, et devrait être maintenue dans la
plage spécifiée pour l'espèce testée (appendices 2 et 3).
1.6. DESCRIPTION DE LA MÉTHODE
1.6.1. Enceintes d'essai
N'importe quel récipient en verre ou fabriqué dans un matériau chimiquement inerte peut être utilisé. Les récipients
doivent être suffisamment grands pour répondre aux critères de charge (voir point 1.7.1.2). Il est
recommandé de placer les enceintes expérimentales au hasard dans la partie du laboratoire où se déroule l'essai.
Il est souhaitable de disposer les enceintes expérimentales selon un schéma randomisé par blocs, chaque
traitement étant représenté dans chaque bloc, plutôt que de les placer de façon complètement aléatoire,
lorsqu'il existe des effets systématiques dans le laboratoire qui peuvent être contrecarrés par la randomisation
par blocs. Si celle-ci est utilisée, elle doit être prise en compte dans l'analyse ultérieure des résultats. Les enceintes
expérimentales doivent être protégées de toute perturbation indésirable.
1.6.2. Sélection des espèces de poissons
Les espèces de poissons recommandées sont énumérées dans le tableau 1A. Cela n'exclut pas l'utilisation
d'autres espèces (des exemples figurent dans le tableau 1B), mais le mode opératoire devra éventuellement être
adapté afin d'offrir les conditions adéquates. Dans ce cas, les choix de l'espèce et de la méthode expérimentale
doivent être justifiés.
1.6.3. Soin des poissons géniteurs
La ligne directrice 210 de l'OCDE ( 1 ) et les références (2) (3) (4) (5) (6) donnent des indications détaillées sur
la façon de maintenir les poissons géniteurs dans des conditions satisfaisantes.
1.6.4. Manipulation des embryons et des larves
Les embryons et les larves peuvent être exposés, au sein de la cuve principale, dans des récipients plus petits
pourvus de côtés ou d'extrémités en filet, permettant le passage de la solution d'essai. Il est possible d'induire
un écoulement non turbulent dans ces petits récipients en les suspendant à un bras qui déplace le récipient
verticalement, en gardant toujours les organismes submergés; un système de siphon peut aussi être employé.
Les œufs fécondés des salmonidés peuvent être posés sur des supports ou des grilles ayant des ouvertures suffisantes
pour permettre aux larves de passer au travers après l'éclosion. Les pipettes Pasteur conviennent au
prélèvement des embryons et des larves dans les essais semi-statiques où le milieu est entièrement renouvelé
chaque jour (voir point 1.6.6).
Quand on utilise des récipients, des grilles ou des filets pour maintenir les œufs à l'intérieur de la cuve d'essai
principale, ces dispositifs doivent être enlevés après l'éclosion des larves ( 1 ), mais il faut conserver des filets
pour empêcher les poissons de s'échapper. Si les larves doivent être transférées, il ne faut pas les exposer à l'air
ni utiliser de filets pour enlever les poissons des récipients contenant les œufs (ces précautions sont superflues
pour des espèces moins fragiles, comme la carpe). Le moment de ce transfert varie avec l'espèce et il n'est pas
toujours nécessaire. Dans les essais semi-statiques, des béchers ou des récipients peu profonds peuvent être utilisés,
munis, si nécessaire, d'une grille placée un peu au-dessus du fond du récipient. Si le volume de ces récipients
est suffisant pour satisfaire aux critères de charge (voir point 1.7.1.2), il n'est pas nécessaire de transférer
les embryons ou les larves.
( 1 ) OCDE, Paris, 1992, ligne directrice 210, «Poisson, essai de toxicité aux premiers stades de la vie».