1 - EUR-Lex

L 225/250 21.8.2001
Journal officiel des Communautés européennes
FR
1.8.1.6. Température
1.8.1.7. Aération
La température des milieux d'essai devrait être comprise entre 18 et 22 °C. Néanmoins, dans un même essai,
la température ne devrait pas, si possible, varier de plus de 2 °C au sein de cet intervalle (par exemple, 18-20,
19-21 ou 20-22 °C). Il peut être utile d'utiliser un récipient d'essai supplémentaire pour surveiller la température.
Les récipients d'essai ne doivent pas être aérés durant l'essai.
1.8.2. Concentrations d'essai
Il faudrait normalement utiliser au moins 5 concentrations d'essai formant une série géométrique, de préférence
espacées d'un facteur n'excédant pas 3,2. Il convient d'utiliser un nombre approprié de répliques pour
chaque concentration d'essai (voir point 1.8.1.3). L'utilisation de moins de 5 concentrations doit être justifiée.
Les substances ne devraient pas être testées au-delà de leur limite de solubilité dans le milieu d'essai.
Lors de la détermination de la plage de concentrations, il convient de tenir compte des éléments suivants:
i) si l'on cherche à déterminer la CMEO et la CSEO, la plus faible concentration testée doit être suffisamment
basse pour que le taux de fécondité à cette concentration ne soit pas significativement plus bas que
celui du groupe témoin. Dans le cas contraire, il faudra recommencer l'essai en abaissant la concentration
la plus basse;
ii) si l'on cherche à déterminer la CMEO et la CSEO, la plus forte concentration testée devra être suffisamment
élevée pour que le taux de fécondité à cette concentration soit significativement inférieur à celui du
groupe témoin. Dans le cas contraire, il faudra recommencer l'essai en augmentant la concentration la
plus forte;
iii) si l'on veut estimer la CE x relative aux effets sur la reproduction, il est conseillé d'utiliser des concentrations
suffisantes pour définir cette CE x avec un niveau de confiance satisfaisant. Si l'on évalue la CE 50 relative
aux effets sur la reproduction, il est souhaitable que la concentration d'essai la plus forte soit supérieure
à cette CE 50. Si tel n'est pas le cas, on pourra toujours estimer la CE 50, mais l'intervalle de
confiance sera très large et on risque de ne pas être en mesure d'évaluer la pertinence du modèle;
iv) il vaut mieux éviter d'inclure dans la plage des concentrations d'essai celles qui ont un effet statistiquement
significatif sur la survie des adultes parce que, ce faisant, on modifierait la nature de l'essai qui passerait
d'un simple essai de reproduction à un essai combiné de reproduction et de mortalité, ce qui exige
une analyse statistique bien plus complexe.
Une connaissance préalable de la toxicité de la substance d'essai (résultant d'une étude de toxicité aiguë et/ou
d'études de détermination de l'ordre de grandeur) devrait faciliter la sélection de concentrations d'essai pertinentes.
Lorsqu'un solvant ou un dispersant est utilisé pour faciliter la préparation des solutions d'essai (voir point
1.6.4), sa concentration finale dans les récipients d'essai ne doit pas dépasser 0,1 ml/l et doit être identique
dans tous les récipients d'essai.
1.8.3. Témoins
Il faudrait tester une série de témoins du milieu d'essai et, le cas échéant, une série de témoins contenant le
solvant ou le dispersant, parallèlement aux séries traitées avec la substance d'essai. Le cas échéant, la concentration
du solvant ou du dispersant doit être identique à celle utilisée dans les récipients contenant la substance
d'essai. Il convient d'utiliser un nombre approprié de répliques (voir point 1.8.1.3).
Généralement, dans un essai correctement mené, le coefficient de variation autour du nombre moyen de descendants
vivants produits par animal parent dans le ou les groupes témoins devrait être Ä 25 %, et cette information
doit être communiquée pour les essais où les animaux sont maintenus dans des récipients individuels.
1.8.4. Renouvellement du milieu d'essai
La fréquence de renouvellement du milieu dépend de la stabilité de la substance d'essai, mais devrait être au
moins trihebdomadaire. Si les essais préliminaires de stabilité (voir point 1.4) montrent que la concentration
de la substance d'essai n'est pas stable (c'est-à-dire en dehors de la fourchette de 80-120 % de la concentration
nominale ou inférieure à 80 % de la concentration initiale mesurée) durant la période de renouvellement la
plus longue (3 jours), il faut envisager de renouveler le milieu plus fréquemment ou de pratiquer un essai
dynamique.