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L 225/256 21.8.2001 Journal officiel des Communautés européennes FR Milieux M4 et M7 Les milieux M4 et M7 sont préparés à partir de la solution mère II, des macronutriments et des vitamines suivants: Solution mère II (combinaison de substances en traces) Quantité ajoutée à l'eau (mg/l) Concentration (par rapport au milieu M4) (fois) Solutions mères contenant les macronutriments (une substance par solution) Quantité de solution mère ajoutée pour préparer le milieu (ml/l) M4 M7 20 50 50 CaCl 2 *2H 2O 293 800 1 000 1,0 1,0 MgSO 4 *7H 2O 246 600 2 000 0,5 0,5 KCl 58 000 10 000 0,1 0,1 NaHCO 3 64 800 1 000 1,0 1,0 Na 2SiO 3 *9H 2O 50 000 5 000 0,2 0,2 NaNO 3 2 740 10 000 0,1 0,1 KH 2PO 4 1 430 10 000 0,1 0,1 K 2HPO 4 1 840 10 000 0,1 0,1 Solution mère de vitamines combinées – 10 000 0,1 0,1 La solution mère de vitamines combinées est préparée en additionnant 3 vitamines à 1 litre d'eau, comme indiqué cidessous: Chlorhydrate de thyamine 750 10 000 – – Cyanocobalamine (B 12) 10 10 000 – – Biotine 7,5 10 000 – – La solution mère de vitamines combinées est congelée par petites parties aliquotes. Les vitamines sont ajoutées au milieu peu de temps avant son utilisation. Notes: Afin d'éviter la précipitation des sels lors de la préparation du milieu complet, il faut ajouter les parties aliquotes de solution mère à quelque 500-800 ml d'eau désionisée et amener le volume à 1 litre. La première publication relative au milieu M4 se trouve dans Elendt, B. P. (1990). Selenium deficiency in crustacea; an ultrastructural approach to antennal damage in Daphnia magna Straus. Protoplasma, 154, pp. 25-33.
21.8.2001 L 225/257 Journal officiel des Communautés européennes FR APPENDICE 2 ANALYSE DE LA TEN<strong>EUR</strong> EN CARBONE ORGANIQUE TOTAL (COT) ET ÉTABLISSEMENT D'UN NOMOGRAMME POUR LA TEN<strong>EUR</strong> EN COT DES ALIMENTS À BASE D'ALGUES Il est admis que la teneur en carbone des algues alimentaires n'est généralement pas mesurée directement, mais déduite de corrélations (par nomogramme) avec des paramètres de remplacement comme le nombre de cellules d'algues ou l'absorbance de la lumière. Il faudrait mesurer le COT par oxydation à haute température plutôt que par les méthodes aux UV ou au persulfate (voir: The Instrumental Determination of Total Organic Carbon, Total Oxygen Demand and Related Determinands 1979, HMSO 1980; 49 High Holborn, London WC1V 6HB). Pour établir le nomogramme, il y a lieu d'isoler les algues du milieu de croissance par une centrifugation suivie d'une remise en suspension dans de l'eau distillée. On mesure le paramètre de remplacement et la teneur en COT dans chaque échantillon, produit en triple exemplaire. Les témoins contenant uniquement de l'eau distillée devraient être analysés et la teneur en COT déduite de celle de l'échantillon contenant les algues. Les nomogrammes devraient être linéaires sur la plage prescrite des concentrations de carbone. Des exemples sont présentés ci-dessous. NB: Ne pas utiliser pour les conversions; il est essentiel que les laboratoires établissent leurs propres nomogrammes. mg/l de poids sec d’algues alimentaires concentrées 1700 1600 1500 1400 1300 1200 1100 1000 900 800 700 600 500 400 300 200 100 0 –100 Chlorella vulgaris, var. viridis (CCAP 211/12). Régression des mg/l de poids sec en fonction des mg de C/l. Données provenant de suspensions concentrées de cultures semi-continues de cellules, remises en suspension dans de l’eau distillée Coefficient de corrélation — 0,980 000 500 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 mg C/l d’algues alimentaires concentrées
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