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4. Biologie moléculaire a) Dot Blot Hybridation ou hybridation utilisant un ADN viral cloné (150)(203)(204)(205) On isole le virus du plasma par centrifugation. On clone l'ADN par un procédé complexe, l'ADN est alors marqué au phosphore 32 (
On peut alors mettre en évidence le génome par hybridation ou on peut l'analyser par séquençage des nucléotides. La technique est coûteuse et réservée à certaines indications: - Si l'infection est persistante chez un sujet immunodéprimé avec des réponses sérologiques paradoxales. - Pour la recherche d'une contami nation fœtale quand il Y a une primoinfection sérologiquement prouvée chez la mère. La recherche du virus se fait de préférence sur le liquide amniotique parce que les IgM n'apparaissent dans le sang fœtal qu'à la 18 ème semaine d'aménorrhée. Une deuxième PCR peut être indiquée si il y a persistance de signes d'appel fœtaux et absence de séroconversion maternelle. Description de la technique de PCR : - l'amplification est effectuée sur une portion d'ADN longue de quelques centaines de bases dont la séquence nucléotidique est connue au moi ns partiellement. - on utilise deux amorces, des oligonucléotides synthétiques susceptibles de s'apparei 11er spécifiquement avec chacun des deux brins d'ADN complémentaires aux extrémités de la portion choisie par l'amplification. - à partir des amorces, une ADN polymérase thermorésistante, Taq polymérase, fabrique une copie de chaque brin d'ADN ce qui multiplie par deux le nombre initial de copies de la portion d'ADN concernée. 159
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La réticulocytose est augmentée.
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