4 - Bibliothèques de l'Université de Lorraine
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- puis, on pratique <strong>de</strong>s cycles thermiques sur les brins (à renouveler<br />
30 fois ; chauffage à 90 0 pour séparer les brins, à 50 0 pour<br />
hybri<strong>de</strong>r les amorces, à 70 0<br />
pour la réplication).<br />
Il en résulte que la région encadrée par les nucléoti<strong>de</strong>s est<br />
considérablement amplifiée. Cette amplification est exponentielle.<br />
Pour<br />
n cycle, le facteur d'amplification est en théorie <strong>de</strong> 2 n environ<br />
10 30 (en fait 10 20 car le ren<strong>de</strong>ment est mauvais).<br />
- la visualisation <strong>de</strong> la portion d'ADN amplifiée est obtenue par<br />
électrophorèse en gel d'agarose et coloration au bromure d'ethidium.<br />
On obtient alors une ban<strong>de</strong> d'ADN homogène. On vérifie l'efficacité<br />
<strong>de</strong> l'amplification et sa spécificité en comparant la longueur du<br />
fragment obtenu à celle attendue d'après les amorces choisies.<br />
La moindre impureté <strong>de</strong> nucléoti<strong>de</strong> est amplifiée. La technique<br />
nécessite une rigueur méthodologique fondamentale (propreté du<br />
matériel et l'isolement <strong>de</strong> l'aci<strong>de</strong> nucléique).<br />
I.POUVOIR PATHOGENE EXPERIMENTAL<br />
Des expériences sur volontaires sains ont été réalisées (An<strong>de</strong>rson et<br />
collaborateurs en 1985) par insti lIation <strong>de</strong> Parvovirus B19 en<br />
intranasal. (149)(150)(155)(208)<br />
Après pénétration dans l'organisme, le virus diffuse dans les<br />
différents organes à l'occasion d'une virémie intense survenant<br />
environ une semaine après contamination (10 11 particules virales/ml<br />
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