situ hibridizasyon yöntemi i - Çukurova Üniversitesi

2.6.3. Mutasyon Analizi
Amlifiye DNA parçacıklarında konvansiyonel nükleotid dizileri elektroforezle
dizi reaksiyonundan sonra analiz edilir. Bu tekniğin büyük bir avantajı sensitif olması
ve yalnızca sınırlı miktarda tümör DNA’sı gerektirmesidir. Dezavantajı, güvenilir
mutasyon değerlendirmesi için dokunun en az %70’i oranında bir tümörden ibaret
olmasını gerektirmesidir. 135
2.6.4. Floresan In-Situ Hibridizasyon
Floresan in-situ hibridizasyon (FISH), translokasyonlar ve kopya sayısı
değişikliklerini tesbit etmek için kullanılmaktadır. Temel prensip olarak, hedef DNA
sekansı tek-sarmallı hale denatüre edildikten sonra, tamamlayıcı prob DNA sekansının
haptenlerle (örneğin biotin, digoksigenin) veya florokromlarla (örneğin floresan,
rhodamin, coumarin, cy-3, cy-5, turuncu spektrum, yeşil spektrum) işaretlenmesi
esasına dayanır. Prob, tamamlayıcı çift sarmallı hibridize baz çiftinin bulunduğu
noktaları hedef alır. Sonra bağlanmamış ve zayıf bağlanmış prob molekülleri bağlayıcı
yıkama solüsyonuyla uzaklaştırılır. Hibridize sinyaller floresan mikroskopla incelenir.
Genomlar, sentromerler, telomerler veya genler üzerindeki spesifik bölgelerin
sekansları prob olarak kullanılabilir.
Tümör progresyonu ile birlikte ortaya çıkan kromozomal değişikliklerin
(translokasyonlar, delesyonlar, amplifikasyonlar vb.) interfaz hücrelerde
görüntülenebilmesi bu yöntemin avantajıdır (Şekil 6). 143
39