Chemische und Anatomische Untersuchungen zum Laubabbau in

6.2.1. Extraktion
- 37 -
Material und Methoden
Die Extrahierbarkeit von Tanninen hängt von der Pflanzenart, von der Art des
Gewebes sowie von der Art der Behandlung des Materials ab. Aus frischem
Blattmaterial erfolgt eine bessere Extraktion als aus getrocknetem Material.
(HAGERMAN, 1988)
Laut HAGERMAN (1988) ist das effektivste Extraktionsmittel für die Bestimmung von
monomeren und kondensierten Tanninen nach der Folin Denis bzw. der Butanol HCl
Methode ein Gemisch aus 70% Aceton und 30% Wasser.
Es wurden folgende Extrakte hergestellt:
� Frischmaterial: ca. 150 mg mit der Rasierklinge fein geschnittenes möglichst
homogenes Blattmaterial wurden in verschraubbare 2 ml Reaktionsgefäße
eingewogen und mit 1500 µl 70% Aceton für ca. 24 Stunden bei
Raumtemperatur extrahiert. Parallel dazu wurde ca. 1 g des Pflanzenmaterials
in Papiersäckchen gefüllt und bei 70°C in den Trockenschrank zur
Trockengewichtsbestimmung gelegt.
� Trockenmaterial: Zur Extraktherstellung wurden ca. 30 mg des getrockneten
und gemahlenen Pflanzenmaterials in verschraubbare 2 ml Reaktionsgefäße
gefüllt und mit 1500 µl 70% Aceton für 24 Stunden bei Raumtemperatur
extrahiert.
Während der Extraktion wurden alle Proben regelmäßig geschüttelt. Nach der
Extraktion wurden die Proben abzentrifugiert, der Überstand abgegossen und bis zur
Weiterverarbeitung bei -18°C gelagert.
6.2.2. Folin Denis Methode
Für Untersuchungen bezüglich Herbivorie und Verteidigungsstoffe in Pflanzen gilt die
Folin Denis Methode, die von SWAIN und HILLIS (1959) erstmals beschrieben und von
vielen Autoren abgewandelt und verändert wurde, als eine der Standardmethoden
(MARTIN und MARTIN, 1982; COLEY und BARONE, 1996; HÄTTENSCHWILER et al., 2003).
Diese Methode ist „unspezifisch“ und misst sowohl hydrolysierbare wie auch
kondensierte Tannine und gibt somit den Gesamttanningehalt wieder. Deshalb