Chemische und Anatomische Untersuchungen zum Laubabbau in

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Material und Methoden
erfasst sie auch phenolische Gruppen außerhalb der Tannine und andere oxidierbare
Pflanzeninhaltstoffe wie Ascorbinsäure (HAGERMAN, 1988).
Für die Reaktionen wurden 2 ml Reaktionsgefäße mit Schraubkappe verwendet. Da
der Gesamttanningehalt im zu untersuchenden Material unbekannt ist, wurden im
ersten Durchlauf 100 µl Probe in den Konzentrationen 100%, 50% und 20%
(Verdünnung mit 70% Aceton) eingesetzt. Lagen die erhaltenen Messwerte
außerhalb des kalibrierten Messbereichs, so wurden weitere Messungen mit den
Konzentrationen 5% und 2% an Pflanzenextrakt durchgeführt. Zur vorgelegten Probe
wurden 1000 µl Milli Q (deionisiertes Wasser) und 100 µl Folin Denis Reagens
zugesetzt. Die Reaktionsgefäße wurden geschüttelt und für drei Minuten zur
Reaktion stehen gelassen. Dann wurden 200 µl gesättigte Natriumcarbonatlösung
(15 g Na2CO3 in 100 ml Milli Q) hinzugefügt. Die Ansätze wurden mit 600 µl 70%
Aceton auf 2 ml aufgefüllt und wieder geschüttelt. Nach einer Stunde Reaktionszeit
wurde die Absorption bei 620 nm vermessen.
Die Methode wird mit handelsüblicher Tanninsäure standardisiert. Dazu wurde eine
Tanninsäurelösung (25 mg Tanninsäure in 100 ml 70% Aceton) in 8 Verdünnungen
(100, 50, 25, 12.5, 6.25, 3.125, 1.5625, 0.78125 µl Tanninsäurelösung mit 70%
Aceton auf 100 µl Gesamtvolumen aufgefüllt) dem Rezept der Proben entsprechend
angesetzt und auch bei 620 nm gemessen. Zum Abgleich des Photometers wurde
eine Leerprobe mit 100 µl 70% Aceton anstatt der Probe hergestellt. Die Messwerte
wurden über die Standardisierungskurve in Tanninsäureäquivalente relativ zum
Trockengewicht (TTM) umgerechnet.
6.2.3. Butanol HCl Methode
Zur Bestimmung der kondensierten Tannine wird neben der Vanillin HCl Methode die
Butanol HCl Methode in ökologischen Studien häufig verwendet (COLEY und BARONE,
1996; HÄTTENSCHWILER et al., 2003). Die erstmals von PORTER et al. (1986)
beschriebene Methode ist relativ einfach in der Durchführung und spezifisch für
quantitative Analysen von kondensierten Tanninen.
Die Reaktion wird mit saurem Butanol (950 ml n-Butanol mit 50 ml konz. HCl)
durchgeführt. Dazu wurden in 2 ml Reaktionsgefäße mit Schraubkappen je 1500 µl