第10期 - 中华行为医学与脑科学杂志

中 华 行 为 医 学 与 脑 科 学 杂 志 2012 年 10 月 第 21 卷 第 10 期
ChinJBehavMed&BrainSci,October2012,Vol.21,No.10
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大 鼠 建 立 癫 痫 持 续 状 态 (statusepilepticus,SE) 模 型 ,
通 过 免 疫 组 化 法 观 察 海 马 内 Semaphorins3A、 突 触 素
P38 的 表 达 变 化 情 况 , 探 讨 Semaphorins3A、 突 触 素
P38 在 发 育 期 大 鼠 脑 癫 痫 持 续 状 态 后 突 触 可 塑 性 变 化
中 的 可 能 作 用 。
材 料 与 方 法
一 、 材 料
生 后 7d、14d、21d、28d 健 康 SpragueDawley(SD)
4 个 日 龄 大 鼠 (P7、P14、P21 和 P28), 各 日 龄 组 内 大 鼠
体 质 量 和 性 别 之 间 无 统 计 学 意 义 , 每 组 80 只 , 共 320
只 。 再 将 各 组 大 鼠 按 随 机 数 字 表 法 分 为 模 型 组 (SE
组 ) 和 正 常 对 照 组 (NS 组 ), 戊 四 氮 (PTZ,80mg/kg,i
p) 或 等 体 积 NS 注 射 后 随 机 分 为 1d、7d、14d、21d、
28d 五 个 时 间 点 , 每 个 时 间 点 8 只 。 所 有 大 鼠 均 在 同
一 实 验 室 和 动 物 中 心 操 作 和 喂 养 , 以 保 持 喂 养 、 光 照 、
噪 声 等 条 件 相 同 , 减 少 外 界 干 扰 造 成 的 差 异 。SE 模 型
[4]
的 建 立 主 要 依 据 周 保 健 等 方 法 进 行 。
二 、 方 法
1. 灌 注 取 材 及 组 织 化 学 染 色 法 : 大 鼠 经 4% 多
聚 甲 醛 灌 注 固 定 , 快 速 取 脑 入 4% 的 多 聚 甲 醛 固 定 10
~12h(4℃), 常 规 石 蜡 包 埋 , 全 脑 连 续 冠 状 切 片 , 片
厚 40μm, 每 隔 6 张 取 1 张 , 组 成 多 套 切 片 。 切 片 脱 蜡
至 水 ;3% H 2 O 2 室 温 10min; 微 波 修 复 后 10% 羊 血 清
封 闭 30min, 兔 抗 大 鼠 Semaphorins3A 抗 体 或 P38 抗
体 (Abcom 公 司 ,1∶200),4℃ 孵 育 过 两 夜 ; 生 物 素 化 羊
抗 兔 二 抗 (1∶200),4℃12h; 辣 根 过 氧 化 物 酶 标 记 链 霉
卵 白 素 液 (1∶200)37℃ 孵 育 4h, 最 后 用 0.01mol/L 磷
酸 缓 冲 液 洗 3 次 ,DAB 显 色 3~5min 后 封 片 观 察 。
2. 统 计 学 处 理 : 用 ImageProPlus6.0 图 像 分 析 软
件 、 以 积 分 光 密 度 值 (IOD) 测 定 齿 状 回 、 内 嗅 皮 层 、 海
马 CA1 和 CA3 区 的 阳 性 细 胞 , 每 例 标 本 检 测 8 张 切
片 、 每 个 部 位 测 定 3 个 视 野 , 然 后 对 其 求 平 均 值 作 为 每
例 标 本 免 疫 组 化 染 色 的 IOD 值 。 实 验 中 所 有 结 果 均
使 用 SPSS16.0 统 计 软 件 进 行 统 计 分 析 , 所 有 计 量 资 料
数 据 以 均 数 ± 标 准 差 表 示 。 多 组 间 比 较 采 用 单 因 素 方
差 分 析 (OneWayANOVA), 方 差 齐 时 采 用 LSD 法 , 方
差 不 齐 采 用 DunnetT3 法 , 两 两 比 较 采 用 q 检 验 , 以 P