Tireoidite linfocítica - Repositório Aberto da Universidade do Porto

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No estudo imunocitoquímico foi utilizado tecido tireoideu já incluído em parafina e previa mente processado pelas técnicas de rotina para exame histológico. Foram pesquisadas imunoglobulinas intracitoplasmáticas - IgA, IgC e IgM - e tireoglobulina, utilizando o método da peroxidase-antiperoxidase (PAP) para cortes de parafina. II.A - Imunoglobulinas A pesquisa de imunoglobulinas intracito plasmáticas foi efectuada em: - 24 casos de tireoidite linfocftica difusa (24 mulheres, com idade média de 47±13 anos). - 8 casos de tireoidite linfocftica focal (8 mulheres, com idade média de 45 ± 13 anos). n - ESTUDO IMUNOCITOQUlMICO - 6 casos de hiperplasia difusa com infiltrado linfóide (6 mulheres com idade média de 41 ±12 anos). A proporção relativa de células positivas para imunoglobulinas foi avaliada do modo seguinte: a) Nos casos com infiltrado linfóide focal - contagem do número de células positivas para a respectiva imunoglobulina encontradas em 10 áreas sucessivas ocupadas por infiltrado linfóide. b) Nos casos com infiltrado linfóide difuso e de limites mal definidos - contagem do número de células positivas para a respectiva imunoglobulina encontradas em 10 campos sucessi vos, utilizando a ampliação 400x. A contagem foi efectuada em cortes do mesmo fragmento e em áreas o mais possível coincidentes. II.B - Tireoglobulina A demonstração imunocitoqurmica da tireoglobulina foi efectuada em: - 28 casos de tireoidite linfocftica difusa (28 mulheres com idade média de 47 ±12 anos). - 2 casos de tireoidite linfocftica focal (2 mulheres com idades respectivamente de 26 e 36 anos). - 11 casos de hiperplasia difusa (10 mulheres com idade média de 35 ±15 anos e 1 homem com idade de 16 anos). A distribuição, segundo o padrão cito- -arquitectural, dos casos de tireoidite linfocftica era a seguinte: - Tipo hiperplástico - 4 casos (em 2 dos casos a tireoidite linfocftica era focal). - Tipo oxifflico - 21 casos (em 7 casos o infiltrado linfóide era de grau III e em 4 casos existia fibrose). - Tipo indeterminado - 5 casos Os casos de hiperplasia difusa apresen tavam as seguintes características morfológicas: Padrão hiperplástico típico, com vesículas tireoideias de periferia irregular, com células cilíndricas e escasso colóide - 6 casos. Padrão hiperplástico heterogéneo, notando-se algumas áreas de vesículas tireoideias grandes, com células cúbicas e colóide abundante - 4 casos. - Predomínio de vesículas tireoideias grandes, com células cúbicas e colóide abundante-1 caso. (PAP) II.C - Técnica da peroxidase-antiperoxidase II.Cl - Imunoglobulinas Utilizaram-se imuno-soros primários, na diluição de 1:400, contra as cadeias pesadas das imunoglobulinas: anti y / para a IgC; anti a ; para a IgA; anti p, para a IgM. Tanto o imuno-soro 12
primário como os restantes imuno-soros eram da DAKO. A execução da técnica compreendeu: 1 - Desparafinação em xilol: duas passagens de 10 minutos cada uma; duas passagens em alcoól absoluto, de 10 minutos cada passagem. 2 - Inibição da peroxidase endógena: 30 minutos em metanol com 2% de H2O2. 3 - Lavagem em água corrente e depois em tampão TRIS salino 0,05M, pH 7,6 durante 5 a 10 minutos. 4 - Incubação em soro normal de porco, a 20% durante 20 minutos. 5 - Incubação no imuno-soro primário a 1:400, durante 20 minutos. 6 - Lavagem em tampão TRIS salino 0,05M, pH 7,6: 3 passagens, de 10 minutos cada uma. 7 - Incubação em soro de porco anti- -coelho, diluido a 1:80, durante 30 minutos. como em 6. 8 - Lavagem em tampão TRIS salino, 9 - Incubação em peroxidase-antipero- O estudo ultrastrutural foi efectuado em tecido tireoideu de peças cirúrgicas, provenien tes de 32 casos de tireoidite linfocftica e de 13 casos de hiperplasia difusa, e em tecido renal proveniente de material necrópsico e correspondente a 12 exames necrópsicos em cujas tireóides se xidase, a 1:200, durante 30 minutos. 10 - Lavagem, como em 6 e 8. 11 - Coloração com 3,3 diaminobenzidina (DAB), durante 7 minutos (solução de DAB, 5mg/100ml, em tampão TRIS 0,2M, pH 7,2, a que se acrescentou 0,1% de H2O). 12 - Lavagem com tampão TRIS, como anteriormente, mas só uma passagem de 10 minutos. Lavagem posterior em água corrente. 13 - Contraste nuclear com hemateina (em média 5 minutos). Diferenciação em água corrente e desidratação com soluções ascendentes de etanol (50°; 70°; 90° e absoluto). xilol. 14 - Montagem em resina solúvel em 11X2 - Tireoglobulina A técnica utilizada na demonstração da tireoglobulina era sobrepor. Ivel à descrita para as imunoglobulinas, tendo-se apenas usado imuno- -soro primário (anti-tireoglobulina, da DAKO) na diluição de 1:100. m - ESTUDO ULTRASTRUTURAL observaram alterações de tireoidite linfocítica. Dos 32 casos de tireoidite linfocítica, 28 eram formas difusas (28 mulheres com idade média de 47 ±13 anos) e os restantes 4 casos eram tireoidites linfocfticas focais (4 mulheres com idade média de 38 ± 18 anos). 13
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