Luciana Basili Dias Candidíase vulvovaginal em pacientes gestantes

Introdução 26
susceptibilidade aos antifúngicos para espécies de leveduras do gênero Candida e Cryptococcus
neoformans var. neoformans. Os autores citados recomendam meios de culturas, técnicas e
critérios alternativos para a determinação das CIM para leveduras, ao mesmo tempo, propuseram
procedimentos técnicos para fungos filamentosos gerando dados para o protocolo M38-P, que
foram, então, utilizados para estes fungos.
Em 2002, o documento M-27A sofreu algumas modificações (M-27A2) para melhor
adaptar a metodologia da microdiluição, que é mais atrativa para testes de susceptibilidade
antifúngica que a macrodiluição (pela execução mais fácil e por motivos econômicos) passando a
incluir a leitura de 24 horas para Candida spp devido ao crescimento “trailing” (crescimento
residual). Em função desse problema, um isolado que se determina como susceptível em 24
horas pode apresentar-se completamente resistente em 48 horas de incubação (NCCLS, 2002).
O método de macrodiluição proposto pelo CLSI (2005), utiliza o meio de cultura
sintético RPMI-1640 com tampão MOPS, um inóculo de 0,5 a 2,5 x 10 3 UFC/mL, 48 horas de
incubação a 35° C para leveduras do gênero Candida e 72 horas para Cryptococcus neoformans,
e um esquema para preparação de diluições em duplicata. Para os azólicos, o critério
recomendado para a determinação da CIM é de 80% de inibição no crescimento, comparado com
o controle de crescimento. Já o teste de microdiluição é idêntico ao método de macrodiluição,
exceto pelo volume. As suspensões do inóculo estão diluídas em 1:1000 para se obter duas vezes
as concentrações teste. O experimento é realizado em duplicata. Controvérsias existem sobre o
tempo de incubação (24 ou 48 horas). Um tempo de incubação menor seria instrumento eficiente
em laboratórios clínicos.
2.10. Metodologia comercial (Etest)
O Etest é um método utilizado para determinar quantitativamente a susceptibilidade
in vitro aos antifúngicos, baseado em gradientes de concentração dos antifúngicos empregados
em fita plástica, através da técnica de difusão em ágar. Este método nos permite determinar uma
cepa como sensível ou resistente, pois também determina a concentração inibitória mínima
(CIM) (Sanchez & Jones, 1992; Colombo et al., 1995).
Esta técnica tem sido usada por muitos autores, pois é de fácil e rápida execução e
interpretação dos resultados, características estas que fazem da técnica a mais difundida para
estudo da sensibilidade aos antifúngicos (AB Biodisk, 1994).