Luciana Basili Dias CandidÃase vulvovaginal em pacientes gestantes

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Metodologia 39 4.3.4. Provas bioquímicas 4.3.4.1. Zimograma No teste de fermentação de carboidratos foi utilizado o meio basal (conforme fórmula abaixo), acrescido de azul de bromotimol e distribuídos em alíquotas de 2 mL em tubos de Kahn contendo tubos de Durham invertidos, para visualização de gás. As amostras foram testadas quanto à habilidade de fermentar glicose, galactose, maltose, sacarose, lactose, trealose, xilose, melibiose e rafinose. Para tanto, foi adicionado 1 mL da solução de cada carboidrato (preparadas à concentração de 6%) a cada tubo de meio de cultura autoclavados. Meio Basal (Van Der Walt & Yarrow, 1984) - Peptona ........................................................................ 7,5 g - Extrato de levedura ..................................................... 4,5 g - Azul de bromotimol .................................................... 0,4 g - Água destilada ............................................................ 1000,00 mL O pH foi acertado para 6,5. Logo após, o azul de bromotimol foi dissolvido em etanol e adicionado, aos poucos, a este meio até obtenção de coloração verde intensa. Para a preparação do inóculo, uma pequena porção da levedura foi ressuspensa em 5 mL de salina estéril. A concentração celular foi avaliada através do cartão de Wickerham – tratase de uma técnica que permite uma estimativa da densidade de células de uma suspensão, tendo sido estabelecidos quatro níveis de concentração celular com avaliação feita comparativamente, observando-se o crescimento baseado no seguinte critério: 0 (poucas células – linhas totalmente visíveis), 1 (densidade fraca – linhas visíveis, um pouco embaçadas), 2 (densidade média – linhas embaçadas e difusas), 3 (densidade forte – linhas não visíveis). Foram transferidos 0,1 mL da suspensão obdecendo ao critério 2 para cada um dos nove tubos de meio basal, contendo os diferentes açúcares. A bateria de testes foi incubada a 25º C e as leituras foram realizadas periodicamente observando-se a produção de ácido através da mudança de coloração do meio basal para amarelo e a formação de gás capturado no interior do tubo de Durham. As observações foram feitas por um período máximo de sete dias (Lacaz et al., 1991). Os resultados foram considerados positivos em função da produção de gás (Figura 14).
Metodologia 40 Figura 14 – Teste de fermentação de carboidratos, evidenciando fermentação e formação de gás em glicose, maltose, galactose e trealose. Fonte: Imagem obtida pela autora, Lab. Mic. – HGU Amostra nº: 32 – C. albicans 4.3.4.2. Auxanograma Este teste foi realizado visando observar o padrão de assimilação de nove carboidratos (glicose, galactose, maltose, sacarose, lactose, trealose, xilose, melibiose e rafinose) como única fonte de carbono. Para isto, foram preparados: meio C e uma solução de vitaminas, conforme descrito a seguir. Meio C (Lacaz et al., 1991) - Sulfato de amônio .................................................................... 5,0 g - Fosfato de Potássio Monobásico (KH 2 PO 4 ) ........................... 1,0 g - Sulfato de Magnésio Hepta Hidratado (MgSO 4 .7H 2 O) .......... 0,5 g - Ágar .......................................................................................... 20 g - Água destilada .......................................................................... 1000,00 mL Solução de Vitaminas - Biotina ................................................................................ 0,10 mg - Niacina ................................................................................ 6,00 mg
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