Luciana Basili Dias Candidíase vulvovaginal em pacientes gestantes

Metodologia 42
4.4. Testes de sensibilidade aos antifúngicos: cetoconazol, fluconazol,
itraconazol e anfotericina B.
4.4.1. Cepas de referência
As amostras de referência utilizadas neste estudo corresponderam à (C. parapsilosis
– ATCC 22019 e C. krusei – ATCC 6258) e foram gentilmente cedidas pela Dra. Márcia S. C.
Melhem - Instituto Adolfo Lutz - SP.
4.4.2. Microdiluição em caldo - CLSI (2005)
As drogas antifúngicas utilizadas em forma de pó foram: cetoconazol (Sigma, St.
Louis, USA), itraconazol (Janssen – Cilag do Brasil), fluconazol (Pfizer do Brasil) e anfotericina
B (Sigma, St. Louis, USA). As drogas cetoconazol, itraconazol e fluconazol foram gentilmente
cedidas pelos laboratórios fabricantes.
A solução-mãe de cada antifúngico foi preparada conforme recomendação do M27
A2 (CLSI, 2005), utilizando a seguinte equação:
Peso (mg) = Volume (mL) x Concentração (µg/mL)
Potência da substância (µg/mg)
A solução-mãe de fluconazol (FCZ) na concentração de 5120 µg/mL, com potência
de 100%, foi preparada em água destilada e as soluções-mãe de cetoconazol (CTZ), com
potência de 100%, itraconazol (ITZ) com potência de 100% e anfotericina B (AMB), com
potência de 80%, ambos com concentração de 1600 µg/mL, foram preparadas em
dimetilsulfóxido (DMSO). As soluções-mãe dos quatro antifúngicos foram divididas em
pequenas quantidades e colocadas em tubos estéreis para armazenamento em freezer à
temperatura de – 70º C.
No teste de susceptibilidade, cada antifúngico foi avaliado em 10 concentrações
diferentes, preparadas conforme documento M 27 A2 (CLSI, 2005) (Anexos 3 e 4). Para
cetoconazol, itraconazol e anfotericina B, as concentrações foram iguais a 8 µg/mL à 0,015
µg/mL e para fluconazol compreendidos entre 64 µg/mL à 0,12 µg/mL (CLSI, 2005).