Luciana Basili Dias Candidíase vulvovaginal em pacientes gestantes

Metodologia 39
4.3.4. Provas bioquímicas
4.3.4.1. Zimograma
No teste de fermentação de carboidratos foi utilizado o meio basal (conforme
fórmula abaixo), acrescido de azul de bromotimol e distribuídos em alíquotas de 2 mL em tubos
de Kahn contendo tubos de Durham invertidos, para visualização de gás. As amostras foram
testadas quanto à habilidade de fermentar glicose, galactose, maltose, sacarose, lactose, trealose,
xilose, melibiose e rafinose. Para tanto, foi adicionado 1 mL da solução de cada carboidrato
(preparadas à concentração de 6%) a cada tubo de meio de cultura autoclavados.
Meio Basal (Van Der Walt & Yarrow, 1984)
- Peptona ........................................................................ 7,5 g
- Extrato de levedura ..................................................... 4,5 g
- Azul de bromotimol .................................................... 0,4 g
- Água destilada ............................................................ 1000,00 mL
O pH foi acertado para 6,5. Logo após, o azul de bromotimol foi dissolvido em etanol e
adicionado, aos poucos, a este meio até obtenção de coloração verde intensa.
Para a preparação do inóculo, uma pequena porção da levedura foi ressuspensa em 5
mL de salina estéril. A concentração celular foi avaliada através do cartão de Wickerham – tratase
de uma técnica que permite uma estimativa da densidade de células de uma suspensão, tendo
sido estabelecidos quatro níveis de concentração celular com avaliação feita comparativamente,
observando-se o crescimento baseado no seguinte critério: 0 (poucas células – linhas totalmente
visíveis), 1 (densidade fraca – linhas visíveis, um pouco embaçadas), 2 (densidade média –
linhas embaçadas e difusas), 3 (densidade forte – linhas não visíveis).
Foram transferidos 0,1 mL da suspensão obdecendo ao critério 2 para cada um dos nove
tubos de meio basal, contendo os diferentes açúcares. A bateria de testes foi incubada a 25º C e
as leituras foram realizadas periodicamente observando-se a produção de ácido através da
mudança de coloração do meio basal para amarelo e a formação de gás capturado no interior do
tubo de Durham. As observações foram feitas por um período máximo de sete dias (Lacaz et al.,
1991). Os resultados foram considerados positivos em função da produção de gás (Figura 14).