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Serum-free Systems
PANEXIN NTA is a complete chemically defined serum
substitute for the cultivation of adherent cells under serumfree
conditions. PANEXIN NTA is developed with a unique
technology and contains a special 3-dimensional substance
release system (3D-SRS) for an optimal support of cells
with nutrients and growth stimulants.
The ready to use, sterile solution is added to the culture
medium in a final concentration of 10%. It supports the
adherent growth of many cell types in an optimum manner.
Composition:
PANEXIN NTA contains purified proteins, lipids, salts, amino
acids, trace elements, attachment factors and hormones
in an optimized formulation and a new 3-dimensional
substance release system (3D-SRS). PANEXIN NTA contains
no growth factors, undefined hydrolysates or peptones.
Suitability:
PANEXIN NTA is suitable for the cultivation of a variety of
adherent cells under serum-free culture conditions.
Special Advantages:
It has been shown for many cell lines that PANEXIN NTA
can fully replace FBS. Due to selected and pretested raw
materials PANEXIN NTA batches are very homogeneous.
Therefore the complex batch testing known from FBS can
be omitted with the use of PANEXIN NTA. In addition, there
is no need to change the previously used basal medium.
PANEXIN NTA is completely chemically defined and contains
no undefined peptones or hydrolysates. Therefore, the
interpretation of results from studies on effects of
individually added growth factors is easier and more reliable
in serum-free conditions. For cell lines which require specific
growth factors these should be added in a concentration
as previously used.
Instructions for Use :
In many cases a serum-free cultivation can be done without
complex adaptation steps for adherent growing cell lines
such as HEK293, CHO, L929, 3T3A.
• Thaw PANEXIN NTA in a water bath at 37 °C. Please avoid
repeated freeze-thaw cycles!
• Trypsinate adherent cells as usual (e.g. 0.25% trypsin
solution). Once the cells have become round and detach
from the surface (the process can be speeded at 37 °C)
inactivate trypsin with trypsin inhibitor.
• Rinse the cells with DPBS (without Mg ++ /Ca ++ ) and centrifuge,
sterile remove supernatant.
• Resuspend cells in basal medium (e.g. RPMI 1640,
DMEM or other) and count.
• Add 10% sterile PANEXIN NTA to basal medium to
replace FBS.
• Add the cell suspension to the basal medium supplemented
with PANEXIN NTA.
• Initial seeding density 5,000 – 20,000 cells/cm 2 .
• Incubate the cells in the usual way in a CO2 incubator
at 37 °C.
Depending on the cell type, the optimal PANEXIN NTA
concentration can vary from 5% to 15%, comparable to FBS
concentrations used. The optimal PANEXIN NTA concentration
should be determined for each cell line. The tests should be
started at a PANEXIN NTA concentration of 10% as in most
cells the best results were obtained with this concentration.
BIOTECH GmbH
1.6
Serum-freie Systeme
PANEXIN NTA/PANEXIN NTA
PANEXIN NTA ist ein komplett chemisch definierter
Serumersatz zur Kultivierung von adhärenten Zellen unter
serum-freien Bedingungen. PANEXIN NTA wurde mit einer
besonderen Technologie entwickelt und enthält ein
neuartiges 3-dimensio-nales Wirkstoff-Freisetzungssystem
(3D-SRS), um Zellen optimal mit Nährstoffen zu versorgen.
Die gebrauchsfertige, sterile Lösung wird in einer Endkonzentration
von 10% dem Kulturmedium zugesetzt. Es unterstützt
in optimaler Weise das Wachstum vieler adhärenter Zelltypen.
Zusammensetzung:
PANEXIN NTA enthält aufgereinigte Proteine, Lipide, Salze,
Aminosäuren, Spurenelemente, Anheftungsfaktoren und
Hormone in einer optimierten Rezeptur. Es enthält keine
Wachstumsfaktoren, undefinierte Hydrolysate oder Peptone.
Eignung und Anwendungsgebiete:
PANEXIN NTA ist geeignet für die Kultivierung einer Vielzahl
von adhärenten Zellen unter serum-freien Bedingungen.
Besondere Vorteile:
PANEXIN NTA kann für viele Zelllinien anstelle von FBS
verwendet werden. Durch ausgewählte und vorgetestete
Rohstoffe sind die einzelnen Chargen sehr homogen und
aufwändige Chargentestungen - wie sie bei FBS üblich
sind - können entfallen. Das gewohnte Basismedium kann
weiterhin verwendet werden. PANEXIN NTA ist komplett
chemisch definiert und enthält keine undefinierten
Hydrolysate oder Peptone. PANEXIN NTA enthält keine
weiteren Zusätze an Wachstumsfaktoren. Untersuchungen
zur Wirksamkeit von zugesetzten Wachstumsfaktoren
werden dadurch eindeutiger in ihrer Aussage. Für Zelllinien,
die spezifische Wachstumsfaktoren benötigen, sollten
diese weiterhin in der bisher verwendeten Konzentration
zugegeben werden.
Anwendung:
In vielen Fällen kann eine serum-freie Kultivierung ohne aufwändige
Adaptationsschritte durchgeführt werden (adhärent
wachsende Zell-Linien wie z.B. HEK293, CHO, L929, 3T3A).
• PANEXIN NTA im Wasserbad (37 °C) auftauen. (Bitte
wiederholtes Auftauen vermeiden!)
• Adhärente Zellen in gewohnter Weise abtrypsinieren
(z.B. 0,25% Trypsinlösung). Sobald sich die Zellen abgerundet
und von der Oberfläche abgelöst haben (der
Vorgang kann bei 37 °C beschleunigt werden) mit
Trypsininhibitor inaktivieren.
• Zellen in PBS (ohne Mg ++ /Ca ++ ) aufnehmen und zentrifugieren.
Überstand steril abnehmen und verwerfen.
Zellen in Basismedium (RPMI 1640, DMEM oder
andere) resuspendieren und die Zellzahl bestimmen.
• Zum gewohnten Basismedium (z.B. RPMI 1640, DMEM,
MEM, DMEM/F12) 10% PANEXIN NTA steril zugeben.
• Zellsuspension zu dem mit PANEXIN NTA supplementierten
Basismedium geben.
• Einsaatdichte 5.000 – 20.000 Zellen/cm 2 .
• Zellen in der gewohnten Weise im CO2-Brutschrank bei
37 °C inkubieren.
Je nach Zelltyp kann im Einzelfall die optimale PANEXIN
NTA-Konzentration von 5% bis 15% variieren. Die optimale
Konzentration für PANEXIN NTA sollte für jeden Zelltyp
ermittelt werden. Bei 10% PANEXIN NTA-Konzentration
können die Versuche gestartet werden, da mit dieser
Konzentration bei den meisten Zellen die besten Resultate
erzielt wurden.
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