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Serum-free Systems
Preparation of PowerStem ESPro2 medium:
PowerStem ESPro2 basal medium requires supplementation
with PowerStem ESPro2 growth supplement and PowerStem
ESPro2 LIF supplement. PowerStem ESPro2 complete medium
(basal medium with supplement) is stable for 1 month when
stored in the dark at +2° C to +8° C.
Instructions for use:
• Prepare gelatine-coated plates by covering them with a
0.2% gelatine solution for at least 10 min in the incubator.
• mES-cells should always be kept at a relatively high cell
density to maintain their pluripotency.
• The subculture is best carried out from a sub-confluent
culture (70%-80% confluence).
• Individual colonies should not touch each other.
• Too dense growth promotes the differentiation of cells
and thus may cause the loss of pluripotency.
• Trypsinate mES-cells in the usual procedure (e.g. 0.25%
trypsin solution).
• Once the cells have become round and detach from the
surface (the process can be speeded at 37° C), resuspend
them in DPBS by thoroughly pipetting up and down several
times and centrifuge for 5 min at 180x g at room
temperature.
• Evacuate supernatant sterile and remove it.
• Resuspend cell pellet in DPBS again by pipetting up and
down several times.
• Good dissociation of the cells is important, the goal being
to obtain single cells or very small aggregates of only 2-3
cells. Larger cell clumps should not remain.
• Due to the serum-free formulation of PowerStem ESPro2,
there is no trypsin inactivating effect of FBS; use trypsininhibitor
to stop trypsin activity.
• Count cells and plate them on gelatine-coated culture
dishes in supplemented PowerStem ESPro2
• Incubate the cells in the usual way in an incubator at
37 °C and 5% CO 2 .
• Feed cells with fresh PowerStem ESPro2 every second
day.
• The cells should be split at ratios between 1:4 and 1:8
depending on the growth rates.
Please note: For differentiation studies LIF supplement must
be omitted.
mES-cells in PowerStem ESPro2
mES-Zellen in PowerStem ESPro2
BIOTECH GmbH
1.52
Serum-freie Systeme
PowerStem ESPro2 /PowerStem ESPro2
mES-cells in PowerStem ESPro2
mES-Zellen in PowerStem ESPro2
Zubereitung von PowerStem ESPro2:
Dem PowerStem ESPro2 Basal Medium müssen PowerStem
ESPro2 Growth Supplement und das PowerStem ESPro2 LIF
Supplement zugegeben werden. PowerStem ESPro2 Komplettmedium
(Basalmedium mit Supplementen) ist bei richtiger
Lagerung (+2 °C bis +8 °C) einen Monat haltbar.
Gebrauchsanweisung:
• Bereiten Sie mit Gelatine beschichtete Kulturgefäße vor,
indem Sie diese mit einer 0,2% Gelatinelösung bedecken
und für 10 Minuten in den Inkubator geben.
• mES-Zellen sollten immer in einer relativ hohen Zelldichte
gehalten werden, um die Pluripotenz zu erhalten.
• Die Subkultur wird am Besten von einer sub-konfluenten
Kultur durchgeführt (70%-80% Konfluenz)
• Einzelne Kolonien sollten sich gegenseitig nicht berühren.
• Zu dichtes Wachstum fördert die Differenzierung der
Zellen, wodurch ein Verlust der Pluripotenz entstehen
könnte.
• Trypsinieren Sie mES-Zellen mit dem gewohnten Verfahren
(z. B. 0,25% Trypsinlösung).
• Sobald die Zellen rund sind und sich von der Fläche
ablösen (der Prozess kann bei 37° C beschleunigt werden),
setzen Sie diese in DPBS, indem Sie sie einige Male
gründlich auf und ab pipettieren und sie für fünf Minuten
bei 180x g bei Raumtemperatur zentrifugieren
• Entfernen Sie den Überstand unter sterilen Bedingungen.
• Nehmen Sie die Zellpellets noch einmal in DPBS auf,
indem Sie einige Male auf und ab pipettieren.
• Eine gute Auftrennung der Zellen ist wichtig, das Ziel sind
einzelne Zellen oder sehr kleine Aggregate von nur
2-3 Zellen. Es sollten keine größeren Zellklumpen vorhanden
sein.
• Aufgrund der serum-freien Formulierung von PowerStem
ESPro2 gibt es keinen Inaktivierungseffekt von FBS für
Trypsin; verwenden Sie deshalb Trypsin-Inhibitor, um die
Trypsinaktivität vollständig zu neutralisieren.
• Zählen Sie die Zellen und geben Sie diese mit PowerStem
ESPro2 in Gelatine-beschichtete Kulturgefäße.
• Inkubieren Sie die Zellen auf gewohnte Art und Weise in
einem Inkubator bei 37 °C und 5% CO 2 .
• Füttern Sie die Zellen jeden zweiten Tag mit frischem
PowerStem ESPro2.
• Abhängig von der Wachstumsphase sollten die Zellen im
Verhältnis von 1:4 oder 1:8 geteilt werden.
Bitte beachten Sie: Für Differenzierungsstudien muss das
LIF Supplement weggelassen werden.
ES-cells in medium with 10% FBS
ES-Zellen in Medium mit 10 % FBS
PowerStem ESPro 2 with LIF / mit LIF 100 ml Kit P04-7702K
500 ml Kit P04-77020K
PowerStem ESPro 2 without LIF / ohne LIF 100 ml Kit P04-7762K
500 ml Kit P04-77620K
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