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Serum-free Systems
Preparation of PowerStem HE1 medium:
PowerStem HE1 basal medium requires supplementation
with PowerStem HE1 growth supplement.
Thaw PowerStem HE1 growth supplement before use. The
thawed material should be used immediately or aliquoted
and stored at -20° C. To obtain 500 ml PowerStem HE1
complete medium please add 80 ml of thawed PowerStem
HE1 growth supplement to 420 ml of PowerStem HE1
basal medium. PowerStem HE1 complete medium (basal
medium with growth supplement) is stable for 1 month
when stored in the dark at +2° C to +8° C.
Instructions for use:
• Prepare Fibronectin-coated plates by covering them
with a Fibronectin stock solution (0.5 mg/10 ml of sterile
water) for at least 30 min in the incubator.
Recommended final concentration of Fibronectin:
50 μg/10 cm 2 . If desired, Matrigel matrix can replace
Fibronectin. The recommended dilution is 1:40. The
matrix should be prepared according to the manufacturer’s
instructions.
• The starter culture must be a high quality culture and
there must be a high density of undifferentiated cells.
• The time of subculture is critical. Do not passage the
cells too early, they will plate poorly and differentiate.
The cultures need to grow to near-confluence.
• Individual colonies should not touch each other.
• Too dense growth promotes the differentiation of cells
and thus the loss of pluripotency.
• Use Collagenase for passaging the cells.
• Warm appropriate amount of Collagenase IV solution
(10 mg/ml), wash medium (DPBS) and complete
medium to 37 °C in a water bath.
• Aspirate the medium and add 1 to 2 ml collagenase
to cover the cells.
• Leave for 3 minutes to dislodge cell colonies from
substrate. Do not expose longer than 3 minutes. This
will cause poor plating and may induce differentiation.
• Add 3 ml of culture medium and gently collect cells
with a 5 ml pipette.
• Collect cell suspension and put into conical tube and
centrifuge for 5 min at 300x g at room temperature.
• Re-suspend cells in PowerStem HE1 and plate directly
on fibronectin-covered plate.
• Cells should be split at a recommended ratio of 1:2
every 4-5 days. The cultures should be fed every day.
hES-cells in PowerStem HE1
hES-Zellen in PowerStem HE1
BIOTECH GmbH
1.54
Serum-freie Systeme
PowerStem HE1/PowerStem HE1
hES-cells colony in PowerStem HE1
hES-Zellen Kolonie in PowerStem HE1
Zubereitung von PowerStem HE1 Medium:
Das PowerStem HE1 Basal Medium muss mit dem PowerStem
HE1 Growth Supplement ergänzt werden. Tauen Sie das Power-
Stem HE1 Growth Supplement vor Gebrauch auf. Das aufgetaute
Material sollte entweder sofort aufgebraucht oder aliquotiert
und bei -20 °C gelagert werden. Um 500 ml PowerStem
HE1 Komplettmedium zu erhalten, geben Sie bitte 80 ml
PowerStem HE1 Growth Supplement zu 420 ml PowerStem
HE1 Basal Medium. Das PowerStem HE1 Komplettmedium
(Basalmedium mit Supplement) ist bei richtiger Lagerung im
Dunkeln bei +2 °C bis +8 °C einen Monat haltbar.
Gebrauchsanweisung:
• Bereiten Sie mit Fibronectin beschichtete Platten vor, indem
Sie diese mindestens 30 Minuten im Brutschrank mit einer
Fibronectinlösung (0,5mg/10 ml) bedecken. Empfohlene
endgültige Konzentration von Fibronectin: 50μg/10cm2.
Falls gewünscht, kann Matrigel-Matrix das Fibronection
ersetzen. Die empfohlene Verdünnung ist 1:40. Die Matrix
sollte nach Anweisungen des Herstellers vorbereitet werden.
• Die Anfangs-Kultur muss von hoher Qualität sein und muss
eine hohe Dichte an undifferenzierten Zellen aufweisen.
• Der Zeitpunkt der Subkultur ist kritisch. Passagieren Sie
die Zellen nicht zu früh, da diese sonst schlecht anwachsen
und sich differenzieren. Die Kulturen sollen bis fast zur
Konfluenz wachsen.
• Einzelne Kolonien sollten einander nicht berühren. Zu
dichtes Wachstum fördert die Differenzierung der Zellen
und kann zu Verlust der Pluripotenz führen .
• Für das Passagieren der Zellen verwenden Sie bitte
Collagenase.
• Erwärmen Sie die entsprechende Menge Collagenase IV
Lösung (10 mg/ml), das Waschmedium (DPBS) und das
Komplettmedium in einem Wasserbad bei 37° C.
• Saugen Sie das Medium ab und überdecken Sie die Zellen
mit 1 bis 2 ml Collagenase.
• Nach 3 Minuten sollten sich die Zellkolonien vom Substrat
lösen. Warten Sie allerdings nicht länger als 3 Minuten, da
sonst die Zellen schlecht anwachsen und möglicherweise
eine Differenzierung ausgelöst wird.
• Geben Sie 3 ml Kulturmedium dazu, sammeln Sie die
Zellen vorsichtig mit einer 5-ml-Pipette und geben Sie die
Zellsuspension in ein Zentrifugenröhrchen.
• Zentrifugieren Sie 5 min. mit 300x g bei Raumtemperatur.
• Resuspendieren Sie die Zellen in PowerStem HE1 und verteilen
Sie diese direkt auf mit Fibronectin beschichtete Platten.
• Die Zellen sollten alle 4 bis 5 Tage im Verhältnis von 1:2
gesplittet werden. Täglicher Medienwechsel.
hES-cells in medium with 10 % FBS
hES-Zellen in Medium mit 10 % FBS
PowerStem HE1 100 ml Kit P04-7711K
500 ml Kit P04-77110K
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